聚焦蒙牛事件——關(guān)于黃曲霉素的檢測(cè)方法

    12月24日，蒙牛牛奶被檢出含強(qiáng)致癌物黃曲霉毒素M1。12月26日，蒙牛集團(tuán)相關(guān)負(fù)責(zé)人表示，造成產(chǎn)品不合格的原因，是當(dāng)?shù)啬膛ｏ暳弦蛱鞖獬睗癜l(fā)生霉變，奶牛在食用這些飼料后，原奶中的黃曲霉毒素超標(biāo)。而眉山工廠原奶質(zhì)檢員在前期的原奶檢驗(yàn)上出現(xiàn)失誤，導(dǎo)致未能檢出黃曲霉素……

 

    送走了三聚氰胺，又迎來了黃曲霉素�？磥韼捉�(jīng)折騰，民眾的化學(xué)知識(shí)倒增長(zhǎng)了不少。這次我們主要來聊聊黃曲霉素，重點(diǎn)是關(guān)于它的檢測(cè)方法。

 

    黃曲霉毒素（AFT）是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的化合物。黃曲霉毒素是主要由黃曲霉、寄生曲霉產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，在濕熱地區(qū)食品和飼料中出現(xiàn)黃曲霉毒素的機(jī)率最高。

 

    下面先送上一張黃曲霉毒素的近照。

    黃曲霉毒素主要有B1,B2 ,G1 ,G2 以及另外兩種代謝產(chǎn)物M1 ,M2.其中M1 和M2是從牛奶中分離出來的.B1,B2 ,G1 ,G2 ,M1 和 M2 在分子結(jié)構(gòu)上十分接近。這次蒙牛事件的主角是M1。我們來看看各自的化學(xué)結(jié)構(gòu)式。

    B1,B2,M1,M2右邊是一個(gè)五元環(huán)結(jié)構(gòu)，B1的不飽和程度要略大于B2，M1和M2上的呋喃環(huán)多了一個(gè)羥基，而G1和G2是一個(gè)六元環(huán)結(jié)構(gòu)。這里黃曲霉毒素分子中的雙呋喃環(huán)結(jié)構(gòu)是產(chǎn)生毒性的重要結(jié)構(gòu)。研究表明，黃曲霉毒素的細(xì)胞毒作用是干擾信息RNA和DNA的合成，進(jìn)而干擾細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成導(dǎo)致動(dòng)物全身性損害。另外黃曲霉毒素B1能與tRNA結(jié)合形成加成物，黃曲霉毒素-tRNA加成物能抑制tRNA與某些氨基酸結(jié)合的活性對(duì)蛋白質(zhì)生物合成中的必需氨基酸，如賴氨酸亮氨酸,精氨酸和甘氨酸與tRNA的結(jié)合均有不同的抑制作用，從而在翻譯水平上干擾了蛋白質(zhì)生物合成影響細(xì)胞代謝。

 

    看來對(duì)黃曲霉毒素的檢測(cè)勢(shì)在必行�，F(xiàn)在主流的檢測(cè)方法主要有兩種，即高效液相-質(zhì)譜法（HPLC-MS）和ELISA快速檢測(cè)方法。下面我們摘取相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行討論。

 

1. 王巖松等用固相萃取-高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)谷物中黃曲霉毒素 B1 B2 G1 G2 和 M1（下載，提取碼XBpS8G8n）。并且優(yōu)化了液相色譜條件和質(zhì)譜的相關(guān)參數(shù)。如可能含黃曲霉素的谷物樣品經(jīng)研磨成粉末后，直接經(jīng)甲醇-水( V: V = 10: 90) 提取，Oasis HLB固相萃取凈化，乙腈-水( 0. 2%甲酸) 梯度洗脫，選擇電噴霧離子源( ESI) ，正離子掃描多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM) 模式，外標(biāo)法定量。黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2 和M1的定量下限分別為 0.1、0.1、0.2、0.3、0.2ng/g， 平均回收率在74.6% ～89.6% 之間， 測(cè)試精密度( RSD) 在5.2% ～ 11.3%之間。方法已用于谷物樣品檢測(cè)，黃曲霉毒素殘留量最高達(dá)到B1 5.86ng/g 、 G1 8.6ng/g、 M1 4.0ng/g， B2和G2未檢出。

2. 裴世春等將辣根過氧化物酶(HRP)與高純度抗黃曲霉毒素M1（AFM1）單克隆抗體進(jìn)行偶聯(lián)后對(duì)其與AFM1競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化（下載，提取碼Namm149p），并利用AFM1污染標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERMI-BD282(0)、ERMI-BD 283(0.11μg/kg)、ERMI-BD 284(0.44μg/kg)等對(duì)檢測(cè)體系的靈敏度和精確性進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果當(dāng)AFM1-BSA包被質(zhì)量濃度0.25μg/L、抗AFM1 mAb-HRP稀釋2000倍時(shí)dc-ELISA檢測(cè)AFM1的IC50為0.75μg/L，檢測(cè)范圍為0.015～4.05μg/L，添加AFM1至0.45μg/L的鮮奶樣品中檢測(cè)回收率平均為80%，dc-ELISA可滿足鮮乳中AFM1國家殘留限量標(biāo)準(zhǔn)0.5μg/kg的檢測(cè)要求。該體系可應(yīng)用于鮮奶制品中 AFM1 大于0.5μg/kg污染樣品的快速初篩。