DAPI染色液的使用方法及注意事項

瀏覽次數(shù)：9010　發(fā)布日期：2012-1-6　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負

DAPI染色液(DAPI Staining Solution)是經(jīng)過精心優(yōu)化幾乎適用于所有常見細胞和組織細胞核染色的染色液。DAPI，即2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride，也稱DAPI dihydrochloride，分子式為C₁₆H₁₅N₅·2HCl，分子量為350.25，CAS Number 28718-90-3。DAPI是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料。和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。DAPI染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。DAPI的最大激發(fā)波長為340nm，最大發(fā)射波長為488nm；DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后最大激發(fā)波長為364nm，最大發(fā)射波長為454nm。 DAPI染色液用于固定細胞或組織的細胞核染色。

保存條件： -20℃避光保存

使用說明：

1、對于細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。隨后如果需要進行免疫熒光染色，則先進行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進行DAPI染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行后續(xù)的DAPI染色。

2、對于貼壁細胞或組織切片，加入少量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，混勻。

3、室溫放置3-5分鐘。

4、吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

5、直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細胞發(fā)生凋亡時，會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。

注意事項：

1、DAPI對人體有一定刺激性，請注意適當防護。

2、熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。

3、為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。