利用ImageXpress Micro進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間活細(xì)胞成像和心肌細(xì)胞功能評(píng)價(jià)

 

活細(xì)胞成像技術(shù)是最近幾年興起的一項(xiàng)技術(shù)，能夠在細(xì)胞接近生理的狀態(tài)下觀察細(xì)胞形態(tài)改變和蛋白的表達(dá)，該技術(shù)能夠避免傳統(tǒng)采用固定細(xì)胞或組織的研究方法中，固定細(xì)胞過(guò)程中造成的細(xì)胞形態(tài)的改變和結(jié)構(gòu)改變，能夠更加真實(shí)的反映出細(xì)胞的特性，因而廣受推崇。MD 高內(nèi)涵系統(tǒng)具有多種特性能夠進(jìn)行長(zhǎng)達(dá)數(shù)天的活細(xì)胞的觀察，同時(shí)，由于采用著名的MD軟件產(chǎn)品MetaMorph為基礎(chǔ)的MetaXpress高內(nèi)涵分析軟件，具有極高的靈活性和擴(kuò)展能力，除活細(xì)胞成像之外還能夠能夠?qū)δ承┘?xì)胞（如心肌細(xì)胞）的生理藥理特性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

 

    神經(jīng)細(xì)胞是公認(rèn)的較為敏感和脆弱的細(xì)胞，對(duì)于外界環(huán)境較為敏感。對(duì)于活的神經(jīng)細(xì)胞的長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)和觀察具有較大困難。采用能夠?qū)崿F(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞的長(zhǎng)時(shí)間觀察培養(yǎng)。

從新生大鼠大腦海馬獲得約1立方毫米大小組織塊。移入含有0.25%胰酶的離心管中37℃，5%CO² 孵育箱內(nèi)消化20～30 min。加入含胎牛血清的培養(yǎng)液終止消化，離心重懸細(xì)胞，按0.6×10⁵/ml 鋪于96 孔板中。24 h 后換為NeurolbasalMedium/B27 無(wú)血清培養(yǎng)液，以后每2~3 d 半量換液1 次。7 d 后獲得原代神經(jīng)細(xì)胞。

    圖像獲�。�

    將樣品放入有環(huán)境控制功能的MD 內(nèi)，采用激光自動(dòng)聚焦進(jìn)行樣品聚焦，在10X物鏡下每隔5分鐘進(jìn)行一次相差圖像拍攝，結(jié)果如下：

 

 

 

 

 

 

 

 

四種藥物不同濃度作用下心肌細(xì)胞跳動(dòng)頻率的變化。細(xì)胞自發(fā)跳動(dòng)節(jié)律各有不同，通常為20-40次/分鐘。給藥后的5-60分鐘內(nèi)，心肌跳動(dòng)頻率穩(wěn)定，因此以上均為給藥后10分鐘檢測(cè)結(jié)果。

小結(jié)：

采用的高度靈活的系統(tǒng)能夠?qū)π募〖?xì)胞進(jìn)行自動(dòng)成像，其采用的MetaXpress軟件具有極高的靈活性，其具有的Journal功能能夠根據(jù)圖像和實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行隨意的擴(kuò)展，除了進(jìn)行心肌細(xì)胞生理學(xué)評(píng)價(jià)之外，還能進(jìn)行超過(guò)1000個(gè)功能的擴(kuò)展。