酶法組織消化技術——從粗制的膠原酶到高純度消化產(chǎn)品

 

酶法組織消化中常用的膠原酶（Collagenase），能特異性地降解胞外膠原蛋白，使膠原蛋白和纖維粘連蛋白的網(wǎng)狀結構解離，而不損壞細胞表面結構的完整性。由于細胞外基質的成分復雜，除膠原蛋白外，還含有彈性蛋白，糖蛋白等其他大分子結構。而且不同組織類型，不同物種來源，不同年齡的組織中胞外基質組份不同。所以商業(yè)化的膠原酶產(chǎn)品一般是梭狀芽孢桿菌裂解液的粗提物，是膠原酶、胰蛋白酶等蛋白水解酶混合物，能降解膠原蛋白和其他蛋白，及多糖等胞外大分子物質，適用于多種組織的消化應用。

 

但是對于不同實驗研究中分離的特定組織，需要根據(jù)經(jīng)驗來選擇合適的膠原酶產(chǎn)品，并對酶濃度、酶體積、酶作用時間進行摸索，才能找到最佳的消化方案。

 

羅氏膠原酶產(chǎn)品提取自溶組織梭狀芽孢桿菌（Clostridium histolyticum），并根據(jù)不同的酶活和驗證的功能應用分為Collagenase A/B/D/P/H五類產(chǎn)品。被廣泛應用于各種組織中（如肺、心臟、肌肉、骨、脂肪組織、肝、腎、軟骨、乳腺、胎盤、血管、腦組織和腫瘤組織等）單個細胞的分離。應用其獲得的細胞產(chǎn)量、活度和細胞功能性均經(jīng)過嚴格的產(chǎn)品質量控制和驗證。

 

小貼士：

如果您的組織在酶消化分散的過程中，出現(xiàn)膠狀粘連細胞，影響細胞的分散，很可能是由于破碎細胞中DNA釋放至胞外而導致的粘連，可通過DNase的加入使粘連的細胞獲得更好的分散。

 

由于Collagenase粗酶中還含有各種不同的蛋白酶，如其中的淀粉酶和脂肪酶也會消化細胞表面的蛋白，對細胞造成一定的損傷。另外，粗制的膠原酶無法在不同批次產(chǎn)品間保持質量和酶活的一致性。即使針對同一種組織，使用不同批次的膠原酶進行消化，您仍需要對酶濃度、酶體積和酶作用時間進行優(yōu)化。

那么如何使您的組織消化實驗事半功倍呢？

 

羅氏Dispase^®能用于多種組織和器官的原代細胞制備，由于其溫和的特性，在消化過程中對細胞造成的損傷極小，它還能用于細胞的次代培養(yǎng)，也可用于細胞懸液中的聚團消化解聚。Dispase^®是一種純化的中性蛋白酶，提取自多黏芽孢桿菌（Bacillus polymyxa），杜絕了支原體污染的可能性，在寬泛的pH和溫度條件下具有良好的穩(wěn)定性，因此在組織消化過程中的表現(xiàn)比膠原酶更加穩(wěn)定。

羅氏Dispase^®尤其在皮膚組織的表皮分離和上皮層細胞培養(yǎng)中獲得了廣泛的應用。Dispase^®I與Dispase^®II兩者的差別在于純度的不同，Dispase^®I經(jīng)過濾除菌，且每mg Dispase^®I的純度和酶活遠高于Dispase^®II。

 

Liberase Research Grade Enzyme Blends包含了一系列酶混合物，它們由不同比例的中性蛋白酶（非梭菌蛋白酶）和高純度Collagenase I + CollagenaseII混合組成。在絕大部分應用中，Liberase能替換傳統(tǒng)的膠原酶，并增加細胞產(chǎn)率、細胞活性和細胞功能性。

 

在嚴格的酶發(fā)酵和純化工藝條件下，Liberase Research Grade Enzyme Blends去除了梭菌蛋白酶和胰蛋白酶等雜酶，去除了原料中>98%的內毒素和其他死細胞成分，因此有助于在組織消化過程中，大大提升細胞的活率。Liberase系列產(chǎn)品均經(jīng)過濾除菌，具有高度的批間一致性，保證了整個實驗階段的消化質量和重復性。

 

羅氏膠原酶與Liberase系列產(chǎn)品的替換比較

 

小貼士：

1.  Liberase系列產(chǎn)品根據(jù)膠原酶和中性蛋白酶的不同配比，分為不同消化活性的5種產(chǎn)品。您可以參考其他實驗室的研究或已發(fā)表文獻，進行合適產(chǎn)品的選擇和操作流程參考。

 

2.  對于新的組織細胞的消化嘗試，建議從Liberase TM開始您的實驗，Liberase TM的消化活性范圍對各種組織具有良好的通用性。

 

3.  Liberase中Collagenase I + II 的純度很高，與常規(guī)膠原酶消化實驗相比，通常需將孵育時間減少10 –30%。

 

請注意：Liberase Research Grade產(chǎn)品和其他消化酶產(chǎn)品僅供生命科學研究和體外研究使用。請勿將此產(chǎn)品用于臨床和診斷程序（如人胰島移植）。

 

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