細(xì)小病毒B19 IgM ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

DRG 細(xì)小病毒B19 IgM ELISA試劑盒
（德國(guó)DRG原裝進(jìn)口，貨號(hào)：EIA3504）

 

DRG公司的吸小病毒B19 IgM酶免試劑盒可用于人血清中抗細(xì)小病毒B19 IgM抗體的定性和定量檢測(cè)。此試劑盒僅供體外診斷用，在美國(guó)，此試劑盒僅供研究用。

 

2、實(shí)驗(yàn)原理
DRG公司的細(xì)小病毒B19 IgM ELISA試劑盒是一種固相的酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，包被板的微孔中包被了重組的細(xì)小病毒B19抗原）。將稀釋好的病人樣品和即用型的質(zhì)控品加入到微孔中，溫育期間，陽(yáng)性樣品和質(zhì)控品中的細(xì)小病毒B19特異性抗體會(huì)結(jié)合到固相抗原上。洗板除去未結(jié)合的樣品，再微孔中加入辣根過(guò)氧酶標(biāo)記的抗人IgM抗體。在第二次溫育中，IgG酶聯(lián)物會(huì)結(jié)合到這些特異性的IgM抗體上而產(chǎn)生酶聯(lián)免疫復(fù)合物。第二次洗板除去未結(jié)合的酶聯(lián)免疫復(fù)合物。加入TMB底物液后，溶液顯示藍(lán)色。之后加入終止液終止酶促反應(yīng)，此時(shí)容易由藍(lán)色變成黃色。溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與樣品中細(xì)小病毒B19特異性IgM抗體的濃度成反比，450nm處讀取OD值。

4、樣品
此實(shí)驗(yàn)中將用到血清，不能使用溶血、黃疸血或脂血樣品。

1.        樣品的采集，血清，靜脈穿刺采集全血，待其凝血，在室溫下用離心機(jī)分離血清。未完全凝血前請(qǐng)勿離心，接受了抗凝劑治療的病人樣品可能需要更長(zhǎng)的凝血時(shí)間。

2.        樣品的儲(chǔ)存：必須蓋住樣本并在實(shí)驗(yàn)之前于２-８℃下可貯存至24小時(shí)。樣品需要更長(zhǎng)的貯存時(shí)間，必須在實(shí)驗(yàn)之前于-20℃下一次性凍存。融化的樣本在檢測(cè)之前必須要上下倒置幾次。

3.        樣品的稀釋：實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，用零標(biāo)準(zhǔn)品按1：100的比例稀釋樣品。10μL樣品+1ml樣品稀釋液，混合，靜置15分鐘，混合均勻。注意：質(zhì)控品是即用型的，不必稀釋。

 

5、實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，按照稀釋步驟稀釋好洗滌液，準(zhǔn)備好樣品，確定樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量。

1.        將所需數(shù)目的板條置于板架上，實(shí)驗(yàn)至少做以下幾孔。

1孔（如A1孔），用來(lái)做空白孔
1孔（如B1孔），用來(lái)做陰性質(zhì)控
2孔（如C1+D1），用來(lái)做臨界質(zhì)控
1孔（如E1），用來(lái)做陽(yáng)性質(zhì)控
用戶自己決定質(zhì)控品和樣品是否做雙孔。

1.        在所有的微孔中加入洗滌液，浸泡5分鐘。棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，吸水紙上拍干以除去殘余液體。

2.        在B1孔內(nèi)加入100ul陰性質(zhì)控，

在C1和D1孔內(nèi)分別加入100ul臨界質(zhì)控
在E1孔內(nèi)加入100ul陽(yáng)性質(zhì)控
在相應(yīng)的樣品孔內(nèi)分別加入100ul稀釋好的樣品，A1空白孔不用加。

1.        蓋板，室溫溫育(22-25℃)60分鐘。

2.        棄去孔內(nèi)的反應(yīng)液。用稀釋好的洗滌液洗板3次（每孔300ul），在吸水紙上把板拍干以除去殘余液體。注意：洗板步驟是否正確會(huì)明顯影響實(shí)驗(yàn)的靈敏度和精密度。

3.        加100μl的酶聯(lián)物于各孔中，除A1孔。

4.        蓋板，室溫溫育(22-25℃)30分鐘。

5.        棄去孔內(nèi)的反應(yīng)液。用稀釋好的洗滌液洗板3次（每孔300ul），在吸水紙上把板拍干以除去殘余液體。注意：洗板步驟是否正確會(huì)明顯影響實(shí)驗(yàn)的靈敏度和精密度。

6.        每孔加100μl底物液。

7.        蓋板，室溫避光溫育(22-25℃)15分鐘。

8.        每孔加100μl終止液，溶液由藍(lán)色變成黃色。

9.        加終止液后30分鐘內(nèi)在450nm波長(zhǎng)讀取OD值。

6、實(shí)驗(yàn)的有效性
如果實(shí)驗(yàn)?zāi)軡M足如下標(biāo)準(zhǔn)則認(rèn)為實(shí)驗(yàn)有效：
空白孔A1：OD值低于0.100
陰性質(zhì)控B2孔：OD值低于0.200
臨界質(zhì)控（CO）C1/D1：OD值在0.250-0.600之間
陽(yáng)性質(zhì)控E1孔：OD值必須大于臨界質(zhì)控
7、結(jié)果計(jì)算
臨界質(zhì)控平均吸光度值（CO）
計(jì)算兩個(gè)臨界質(zhì)控的平均OD值，如（0.44+0.45）/2=0.445=CO
8、結(jié)果說(shuō)明
陽(yáng)性：病人樣品的平均OD值比臨界OD值高20%以上的樣品，（病人樣品OD＞1.2倍CO）
灰區(qū)：病人樣品的平均OD值在120%CO和90%CO范圍內(nèi)的樣品，（0.9倍CO≤人樣品OD≤1.2倍CO＝。將灰區(qū)樣品重新檢測(cè)，如果樣品OD仍位于灰區(qū)，則樣品為陰性樣品。
陰性：病人樣品的平均OD值比臨界OD值低10%以上的樣品，（人樣品OD＜0.9倍CO＝。
 
結(jié)果按DRG單位計(jì)算（DU）
病人樣品平均OD值*10/CO=DU（DRG 單位）
例如：1.580*10/0.445=35DU
結(jié)果說(shuō)明：
臨界值：10DU
灰區(qū)：9-12DU
陰性：＜9DU
陽(yáng)性：＞12DU

 

本譯文僅供參考，詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。