大黃酚抗衰老作用的實(shí)驗(yàn)研究

 

〔摘　要〕 　目的　探討大黃酚對(duì)小鼠抗衰老的作用。

方法　采用避暗實(shí)驗(yàn),觀察大黃酚對(duì)學(xué)習(xí)記憶的影響;通過(guò)常壓耐缺氧、斷頭耐缺氧、亞硝酸鈉中毒造成的缺氧以及負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn),觀察大黃酚對(duì)小鼠缺氧及耐力的影響;以AlCl3造成急性衰老小鼠模型,觀察大黃酚對(duì)小鼠血中超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響。

結(jié)果　大黃酚能明顯改善記憶障礙、提高小鼠耐力、并且能明顯提高急性衰老小鼠血中SOD活性。

結(jié)論 　大黃酚具有一定的抗衰老作用。

〔關(guān)鍵詞〕 　大黃酚，抗衰老，學(xué)習(xí)記憶，耐力，超氧化物歧化酶

　 據(jù)報(bào)道,大黃有抗衰老作用 ,而大黃中有效成分之一的大黃酚 ( chrys ophanol, Chry)是否具有抗衰老作用國(guó)內(nèi)外報(bào)道極少。我們?cè)谝郧暗难芯恐邪l(fā)現(xiàn)Chry能抑制肝、腦的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),減少丙二醛(MDA)的含量,因此,我們用學(xué)習(xí)記憶、耐力以及老化相關(guān)酶試驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步探討 Chry的抗衰老作用。

1　 資料與方法

1.1　 動(dòng)物 　 昆明種小鼠 , 8～10 w,雌雄兼用。

1.2　 藥品和試劑 　Chry(中國(guó)藥品生物制品檢定所,實(shí)驗(yàn)前用溶劑配成所需濃度)。溶劑 (N,N2 二甲基甲酰胺∶吐溫280∶ 生理鹽水=1∶1∶8)。氧化物歧化酶(SOD)測(cè)試盒。

1.3　儀器 　S BA2 2程控避暗箱,生物信號(hào)采集系統(tǒng)。

1.4　 方法

1.4.1　 大黃酚對(duì)學(xué)習(xí)記憶的影響 　 采用避暗法。

1.4.1.1　 對(duì)東莨菪堿(scopolamine,scop)所致記憶獲得障礙的影響 　

雌性小鼠55只,隨機(jī)分5組,體重(24±2)g。訓(xùn)練前15min,生理鹽水(NS)對(duì)照組腹腔注射(ip)NS011ml/10g,scop模型組及Chry+scop組ip scop3 mg/kg。并于訓(xùn)練前5min,NS組和scop組側(cè)腦室注射(icv)溶劑對(duì)照液5μl,Chry+scop組分別icv100、10、1μg/ml的Chry 5μl,采用避暗箱訓(xùn)練3 min,24 h后測(cè)驗(yàn)記憶成績(jī),記錄每只鼠進(jìn)入暗室的潛伏期和3 min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)。

1.4.1.2　 對(duì)亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙的影響 　 雄性小鼠50只,隨機(jī)分成5組,體重(25 ±3) g。小鼠采用避暗箱先訓(xùn)練3min后,NS對(duì)照組立即皮下注射(sc)NS 011ml/10 g,亞硝酸鈉(NaNO2)模型組及Chry + NaNO2 組 ,立即 sc NaNO2 125 mg/kg,并且 NS組和亞硝酸鈉模型組分別 icv溶劑對(duì)照液 5μl,Chry + NaNO2組分別 icv 100、 10、 1μg/ml的 Chry 5μl, 24 h后測(cè)驗(yàn)記憶成績(jī) ,記錄每只鼠進(jìn)入暗室的潛伏期和 3 min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)。

1.4.1.3　 對(duì)乙醇所致記憶再現(xiàn)障礙的影響 　雄性小鼠60只,隨機(jī)分成5組,體重(21±3) g。測(cè)驗(yàn)前15 min,NS對(duì)照組灌胃(ig)NS 011 ml /10 g,乙醇模型組及Chry+乙醇組ig 30%乙醇011ml/10g。每組小鼠采用避暗箱先訓(xùn)練3min,24h后進(jìn)行測(cè)驗(yàn)。并于測(cè)驗(yàn)前5min, NS組和乙醇模型組icv溶劑5μl,Chry+乙醇組分別icv100, 10, 1μg/ml的 Chry 5μl,記錄每只鼠進(jìn)入暗室的潛伏期和3 min內(nèi)錯(cuò)誤次數(shù)。

1.4.2　 大黃酚對(duì)小鼠耐缺氧及耐力的影響

1.4.2.1　 對(duì)常壓耐缺氧的影響 　雌性小鼠56只,隨機(jī)分成4組,體重 (32±2) g。對(duì)照組icv溶劑對(duì)照液5μl,給藥組分別icv大黃酚 (100, 10, 1μg/ml) 5μl,注射后 5 min進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。參照文獻(xiàn)方法〔3〕,取同組小鼠 2只,放在盛有30g鈉石灰的廣口瓶(250 ml)中,用凡士林密封,以5s內(nèi)不再?gòu)埧诤粑鼮橛^察指標(biāo)。

1141212　 對(duì)斷頭耐缺氧的影響 　雌性小鼠 48只 ,隨機(jī)分成4組,體重(27±2)g。分組和給藥方法同上。參照文獻(xiàn)方法〔3〕,迅速斷頭,觀察小鼠張口呼吸時(shí)間 ,以5s內(nèi)不再?gòu)埧诤粑鼮橛^察指標(biāo)。

1.4.2.3　 對(duì)亞硝酸鈉中毒缺氧的影響 　雌性小鼠 40只,隨機(jī)分成4組,體重(22±3) g。分組和給藥方法同上。參照文獻(xiàn)方法〔3〕,各組立即ip NaNO2 240 mg/kg,并開(kāi)始記錄,以 5 s內(nèi)不再?gòu)埧诤粑鼮橛^察指標(biāo)。

1.4.2.4　 對(duì)負(fù)重游泳的影響 　雌性小鼠56只,隨機(jī)分成4組,體重(32±1) g。分組和給藥方法同上。參照文獻(xiàn)方法〔3〕,記錄小鼠的體重,給小鼠負(fù)重 10%體重的物體 ,系在其尾根部,將其放入水桶中游泳,水桶直徑為30cm,水深20cm,水溫27～28℃,自投入水內(nèi)開(kāi)始 ,記錄小鼠沉入水底死亡的時(shí)間。

1.4.3　 大黃酚對(duì)小鼠老化相關(guān)酶的影響 　雄性小鼠50只,隨機(jī)分成5組,體重 (18±2) g。NS對(duì)照組每天 sc NS 011 ml /10 g,AlCl3模型組及大黃酚+AlCl3組小鼠每天scAlCl370mg/kg,連續(xù)7d。參照文獻(xiàn)方法〔4〕,同時(shí)NS組AlCl 3 70 mg/kgip, Chry+AlCl3組分別i p大黃酚10,1,011mg/kg連續(xù)18d,進(jìn)行酶學(xué)實(shí)驗(yàn)。將小鼠的頸動(dòng)脈切開(kāi)取血,置于1ml的抗凝管(用2 U/μl肝素50μl濕潤(rùn)管壁,低于80℃烤干)中。4000 r/min,離心10min后取血漿10μl,采用羥胺法〔3〕以SOD試劑盒測(cè)定。規(guī)定每 ml反應(yīng)液中 S OD抑制亞硝酸鹽達(dá) 50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量為一個(gè)單位。

1.5　 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 　用 I NST AT2 2統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理 ,以 x ±s表示。數(shù)據(jù)資料用 t檢驗(yàn),錯(cuò)誤百分率用χ 2檢驗(yàn)。

2　 結(jié) 　 果

在本實(shí)驗(yàn)中,Chry各劑量組均能明顯改善Scop所致的記憶獲得障礙、亞硝酸鈉所致的記憶鞏固障礙和乙醇所致的記憶再現(xiàn)障礙,使小鼠進(jìn)入暗室的潛伏期延長(zhǎng),錯(cuò)誤次數(shù)減少,動(dòng)物錯(cuò)誤反應(yīng)率降低,與模型組比較有顯著性差異。在耐力實(shí)驗(yàn)中, Chry可顯著延長(zhǎng)小鼠耐常壓缺氧時(shí)間、斷頭造成的急性缺氧時(shí)間、由NaNO2中毒所致缺氧的時(shí)間,并可顯著延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間 ,與溶劑組比較有顯著性差異,說(shuō)明Chry能提高小鼠耐力,具有抗疲勞的作用。在老化相關(guān)酶實(shí)驗(yàn)中,AlCl3可明顯降低小鼠血漿SOD活性(對(duì)照組為416±31,模型組為300±49,P< 01001) ,而 Chry各劑量組均可明顯提高AlCl3所致急性衰老小鼠血漿 S OD活性 (Chry 10, 1, 011mg/kgSOD分別為366±72, 366±64, 388±67,P值分別為 P<0105, P< 0105, P< 0101)。

3　 討 　 論

學(xué)習(xí)記憶減退是衰老的重要指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,大黃酚(Chry)能明顯改善東莨菪堿(Scop)所致的記憶獲得障礙、NaNO2所致的記憶鞏固障礙和30%乙醇所致記憶再現(xiàn)障礙,使小鼠進(jìn)入暗室的潛伏期延長(zhǎng)、錯(cuò)誤次數(shù)減少、動(dòng)物錯(cuò)誤反應(yīng)率降低 ,具有改善學(xué)習(xí)記憶的功能,機(jī)制有待進(jìn)一步研究。衰老過(guò)程中,動(dòng)物自身退行性變化逐漸增加,對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力減弱。在本實(shí)驗(yàn)中給予小鼠以惡性刺激,即缺氧和負(fù)荷實(shí)驗(yàn)來(lái)觀察小鼠對(duì)環(huán)境變化的適應(yīng)能力。結(jié)果表明,Chry具有明顯的抗缺氧和提高小鼠耐力、抗疲勞的能力,可能與其擴(kuò)血管作用有關(guān)。隨著增齡,人體內(nèi)SOD活性下降,進(jìn)而引起神經(jīng)元細(xì)胞膜損傷,導(dǎo)致腦記憶功能下降。本實(shí)驗(yàn)用鋁誘導(dǎo)急性衰老模型,是以鋁中毒假說(shuō)為基礎(chǔ)的。結(jié)果顯示,AlCl3模型組可明顯降低小鼠血中SOD活性;Chry能明顯提高血中SOD活性,清除過(guò)多的自由基,使腦神經(jīng)元細(xì)胞膜免受過(guò)氧化脂質(zhì)的損傷,從而起到抗衰老作用。