AlphaLISA篩選技術(shù)在SpectraMax Paradigm多功能檢測(cè)平臺(tái)上的應(yīng)用

TNF標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）

ICAM-1和IL-8在HL-MVEC內(nèi)表達(dá)上調(diào)（圖2）

TNF–alpha處理細(xì)胞18小時(shí)后，使用SpectraMax Paradigm平臺(tái)的AlphaLISA方法檢測(cè) HL-MVEC細(xì)胞內(nèi)ICAM-1 (A) 和IL-8 (B) 的上調(diào)水平。

基于內(nèi)皮細(xì)胞篩選鑒定抗炎化合物

      藍(lán)藻是一種藍(lán)綠色藻類，它具有非常多樣的代謝產(chǎn)物。其中一些代謝產(chǎn)物具有很好的治療前景，目前正在研究用于治療炎癥疾病。1,2,3我們使用上面描述的方法從藍(lán)藻中篩選具有抗炎癥的化合物。HL-MVEC預(yù)先使用從Nostoc藍(lán)藻中提取的不同組分進(jìn)行處理，然后使用0.4ng的人TNF-alpha蛋白進(jìn)行刺激。18個(gè)小時(shí)后，在SpectraMax Paradigm平臺(tái)上使用AlphaLISA技術(shù)檢測(cè)得到ICAM-1得以上調(diào)表達(dá)，然后對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清進(jìn)行進(jìn)一步分析IL-8的水平。我們發(fā)現(xiàn)藍(lán)藻8721,6組分（圖3）可以顯著降低ICAM-1的產(chǎn)生，顯示出抗炎癥活性。這個(gè)組分也明顯降低IL-8的表達(dá)分泌（數(shù)據(jù)未給出）。在進(jìn)行AlphaLISA檢測(cè)前，也對(duì)組分進(jìn)行了細(xì)胞毒性檢測(cè)，顯示其細(xì)胞毒性作用很小，可以忽略。

藍(lán)藻中抗炎活性成分的篩選（圖3）

使用AlphaLISA分析藍(lán)藻中各組分的ICAM-1上調(diào)效應(yīng)。組分8721,6可以顯著降低ICAM-1的表達(dá)生成。

總結(jié)

SpectraMax Paradigm平臺(tái)聯(lián)合AlphaLISA提供了一個(gè)強(qiáng)有力的工具，可以使用基于內(nèi)皮細(xì)胞、病理相關(guān)的模型篩選新型的治療藥物。高靈敏度、高速度、高達(dá)1536孔板的兼容性以及內(nèi)置的預(yù)先優(yōu)化的檢測(cè)程序，使用戶操作更簡(jiǎn)單、運(yùn)行更快速。SpectraMax Paradigm是你使用Alpha技術(shù)篩選藥物的最好選擇。

致謝

最后我們要感謝Maren Plüger Anita Eigner、Maria Hirschler、Linda Kotnik、Katrin Fuchslueger、Julia Schweiger、Christoph Wiesner、Andreas Eger、Wolfgang Schütt以及IMC大學(xué)的Harald Hundsberger、Czech 科學(xué)院的Jiri Kopecky，感謝他們慷慨提供數(shù)據(jù)。

參考資料
1. Rasool, M.; Sabina, E. P.; Lavanya, B. Biol Pharm Bull  2006,29(12), 2483 
2. Romay, C.; Armesto, J.; Remirez, D.; Gonzalez, R.; Ledon, N.; Garcia, I.  Inflamm Res 1998, 47(1), 36.[31]
3.  Prinsep, M. R.; Thomson, R. A.; West, M. L.; Wylie, B. L. J Nat Prod  1996, 59(8),