感受態(tài)制備：酵母感受態(tài)細胞制備實驗

一、試劑與耗材

1.  試劑
 
細菌用-酵母提取物（Fisher）、 細菌用-蛋白胨（Fisher）、葡萄糖（Fisher）、細菌用-瓊脂粉、去離子水、甘油(Sigma)、二甲基亞砜(Sigma)、聚乙二醇3350(Sigma)、醋酸鋰(Sigma)、鮭魚精子細胞DNA(Invitrogen)、酵母無氨基酸氮源(Sigma)、 2-(N-嗎啉代) 乙磺酸、腺嘌呤(Sigma)、葡萄糖。
 

2.  儀器
 

水浴鍋(VWR)、離心機(Eppendorf)、30 °C搖床與恒溫培養(yǎng)箱(VWR)、培養(yǎng)皿。

三、制備步驟
 

1.  在轉(zhuǎn)化實驗的兩天前，于YPDA培養(yǎng)基的平皿上活化酵母菌株。
 

2.   轉(zhuǎn)化前一天，挑取活化的酵母細胞（單克�。┯赮PDA液體培養(yǎng)基中，30°C，200 rpm培養(yǎng)過夜。
 

3.  將培養(yǎng)過夜的酵母細胞液按1：3的比例轉(zhuǎn)接與新的YPDA液體培養(yǎng)基中，于30°C搖床內(nèi)，200 rpm培養(yǎng)4 h。
 

4.  3 000 g 離心 5分鐘收集酵母細胞，用0.5倍體積的無菌水洗酵母細胞。
 

5.  再次3 000 g 離心 5分鐘。
 

6.  用0.01倍體積的無菌水重懸酵母細胞，并轉(zhuǎn)入適宜的離心管中，20°C ，3 000 g 離心 5分鐘。
 

7.  用0.01倍體積的無菌細胞懸浮液(5 % v/v 甘油，10% v/v 二甲基亞砜)重懸酵母細胞。
 

8.  將重懸的酵母細胞按50 ul分裝到1.5 ml離心管中。
 

9.  將管放入塑料盒或者紙盒中（逐步梯度冷凍能夠增強酵母的存活率）。
 

10.  將裝有酵母細胞的盒子放入-80°C冰箱。（細胞在-80°C能夠保存一年以上）。