免疫學(xué)技術(shù)專題：斑點(diǎn)金免疫滲濾測(cè)定法（DIGFA）

基本原理

斑點(diǎn)金免疫滲濾測(cè)定法是在斑點(diǎn)免疫滲濾測(cè)定法基礎(chǔ)上，改用膠體金標(biāo)記物代替酶，省去底物顯色的步驟。試驗(yàn)方法是以硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將試劑及標(biāo)本滴加在膜上，通過(guò)滲濾而逐步反應(yīng)。全過(guò)程可于數(shù)分鐘內(nèi)完成，陽(yáng)性結(jié)果在膜上呈紅色斑點(diǎn)。

試劑及材料

1. 滲濾裝置：為一塑料小盒（4x3x0.6cm），分為底、蓋兩層，蓋的中央有一個(gè)直徑0.5cm的小孔。盒底充填吸水性較強(qiáng)的墊料，蓋孔下，緊貼墊料放置一片NC膜。緊閉盒蓋，即為滲濾裝置。在孔中的NC膜上點(diǎn)加1-2ml特異性抗體(一抗)或抗原，室溫自然干燥，保存于放干燥劑的密封塑料袋中備用。

2. 封閉液：含0.2%BSA和0.05%吐溫-20的洗滌液。

3. 洗滌液：50mol/L，pH7.2 PBS。

4. 特異性抗體(一抗)或抗原

5. 金標(biāo)抗體

操作方法

1. 取出滲濾器，先在小孔的NC膜上，滴加2滴（約100ml）封閉液；

2. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，加待檢標(biāo)本1滴（約50ml）；

3. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，滴加2滴（約100ml）洗滌液；

4. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，加金標(biāo)抗體1滴（約50ml），使其與NC膜上吸附的檢品發(fā)生反應(yīng)；

5. 待其滲入盒內(nèi)，在NC膜上，滴加2滴（約100ml）洗滌液；

6. 至洗滌液完全滲入盒內(nèi)

結(jié)果觀察

在小孔NC膜上出現(xiàn)紅色反應(yīng)時(shí)為陽(yáng)性反應(yīng)，陰性反應(yīng)不著色。

注意事項(xiàng)

1. 特異性抗體(一抗)或抗原、待檢標(biāo)本和金標(biāo)抗體的用量事先都必須應(yīng)用方陣法確定最適用量。

2. 盒底充填的墊料吸水性要強(qiáng)，否則影響結(jié)果。