總RNA提取試劑（Trizol法）使用說明書

『訂購信息』
目錄號    產(chǎn)品名稱    規(guī)格
MTO-1009    2×PCR TaqMix（有染料）    1ml
MTO-1010    2×PCR TaqMix（無染料）    1ml
MTQ-1001    2×qPCR TaqMix    1ml
41003    GelRed核酸染料    500ul
31000    20×EvaGreen    1ml
DDLK-010    DIG DNA PCR標記試劑盒    10T
RDLK-010    隨機引物法DIG標記試劑盒    10T
DIGD-110    DIG雜交檢測試劑盒Ⅰ（NBT/BCIP法）    10T
DIGD-210    DIG雜交檢測試劑盒Ⅱ（CDP-Star法）    10T
Hyb-50、Hyb-100    Hyb高效雜交液    50ml、100ml

產(chǎn)品編號：MRN0210

MyLab® 總RNA提取試劑
（適用于動物組織/植物組織、昆蟲和細胞）
（Trizol法）
使用說明書

規(guī)格    保存    有效期
100ml    2-8℃    12個月
『用途與特點』
1.    本試劑盒可用于幾乎所有新鮮或液氮保存的動物和植物組織、昆蟲和細胞RNA的快速提取，通用性好。
2.    無須DNA酶、RNA酶抑制劑等。
3.    所需樣品量少，并且可根據(jù)起始材料的多少自行調(diào)整。
4.    操作簡便，整個過程<1h。
5.    提取的RNA純度高，無蛋白質(zhì)和DNA污染，不需要其它處理立即可用于下游實驗如RT-PCR擴增、Northern印跡分析、點印跡雜交、Poly(A)+選擇、體外翻譯、RNA酶保護實驗及分子克隆等。
『自備試劑』
異丙醇；無RNase的75%乙醇；DEPC處理H2O；3M醋酸鈉；氯仿。
『注意事項』
1.    嚴防操作環(huán)境、使用的容器耗材和試劑的RNase污染。所用器具與耗材進行無RNase處理。操作過程中勤換手套。
2.    過多或過少都有可能影響RNA的質(zhì)量或產(chǎn)率。若起始材料量很少，RNA預計產(chǎn)量很低，在異丙醇沉淀時，可加入20mg/ml肝糖原溶液0.5~1μl協(xié)助RNA沉淀。
3.    將RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測其在OD260的光吸收，不要將RNA稀釋在蒸餾水或DEPC水中檢測OD260。
4.    請勿直接接觸皮膚或吞咽，以免灼傷。如接觸皮膚應立即用溫和的洗滌劑和大量水沖洗。忌用乙醇擦洗，乙醇會加重灼傷程度。如有不適，請馬上尋求醫(yī)生的幫助。
5.    本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床治療、食品等用途。
『操作步驟』
1.    裂解處理：
①    動物/植物組織、昆蟲：


25-100 mg液氮冷凍或新鮮的組織，放入存有液氮的研缽里 ，立即研磨至粉狀（在研磨過程中研缽內(nèi)最好始終保持有液氮）。研好后直接向此研缽內(nèi)加入1ml 總RNA提取試劑，繼續(xù)研磨成粉狀。稱取
② 細胞
1）懸浮培養(yǎng)的細胞：
  離心沉淀收集細胞，每5-10×106動物、植物和酵母細胞加1ml 總RNA提取試劑。加入總RNA提取試劑前最好不要洗滌細胞，以免增加mRNA降解及RNA酶污染的可能性。
2）貼壁培養(yǎng)的細胞：
直接在培養(yǎng)板中加入總RNA提取試劑裂解細胞，每10cm2面積加1ml 總RNA提取試劑。用取樣器吹打幾次。
注：總RNA提取試劑的用量根據(jù)培養(yǎng)皿的面積決定，而不是由細胞數(shù)決定的。如果總RNA提取試劑加量不足，可能導致提取的RNA中有DNA污染。如果裂解物用槍頭吸起來時很粘稠，往往需多加點總RNA提取試劑。
2.  室溫放置 5-10min使其充分裂解，至融化成液態(tài)后移入無RNase的1.5ml離心管（在研磨成粉狀后直到室溫融合成液態(tài)的過程中不可以再用研磨杵攪動，不然會產(chǎn)生DNA污染）。注：此時可放入-70℃長期保持。
3.  把上述液體移入1.5ml離心管中，并向其中加入200μl氯仿，蓋上管蓋。劇烈振蕩混勻后室溫放置5min。注：禁用漩渦振蕩器，以免基因組DNA 斷裂。
4.  4℃ 12,000 rpm 離心 15min。樣品分為三層：底層為粉紅色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要存在水相中。
5.  小心吸取上層水相至另一離心管中。注：千萬不要吸取中間界面。
6.  向離心管中加入等體積的異丙醇和1/10體積 3M的醋酸鈉，上下輕柔顛倒混勻，-20℃放置15-20min。
7.  4℃ 14000 rpm離心15min，倒掉上清，注意不要觸到沉淀。離心前RNA沉淀經(jīng)常是看不見的，離心后在管側和管底形成膠狀沉淀。
8.  加入200ul的75%乙醇，溫和振蕩離心管，懸浮沉淀。4℃ 離心2-3min棄上清。盡量棄上清。
9.  把離心管放置于超凈臺晾至約2-3min（勿完全干燥）。加入30-50μl的無RNase的水。振蕩30sec，瞬時離心。
10. 將提取的RNA立即進行下游實驗，或放-70℃保存。