GelRedTM核酸凝膠染色劑操作步驟

產(chǎn)品名稱:    GelRedTM核酸凝膠染色劑,10,000X in DMSO
產(chǎn)品編號:    41002
包裝規(guī)格:    0.5 mL / 0.05 mL
貯存和處置方法:    GelRed 10,000X in DMSO可在室溫條件下儲存一年以上。盡管并非必須，GelRed 依舊可以在低溫、避光環(huán)境下長時間貯存。但在正常的室內(nèi)光照實驗條件下，該染色劑可以安全操作。
應用:    GelRed 是一種具有凝膠染色特性，并被設(shè)計為替換高毒性染色劑－溴化乙錠（EB）的紅色熒光核酸染色劑。 因為GelRed 與EB有著相同的光譜特性（如圖1），所以您可以在不改變?nèi)魏纬上裣到y(tǒng)的情況下用GelRed 替換EB。
如果您目前使用的是SYBR(如SYBR Green 1/SYBR Gold)染色劑，并使用紫外投射器(UV transilluminator）來觀察凝膠，那么您可以使用GelRed 替換SYBR染色劑，不需要更換現(xiàn)有的SYBR慮光片。
然而，在488 nm 激光或類似可見光下 GelRed 不能被充分地激發(fā)， 如果需要，我們建議您使用我們的GelGreen(Cat# 41004)染色劑，其靈敏度與SYBR Green 1 一樣，但其穩(wěn)定性和可靠性遠勝于后者。
GelRed 既可用于前染(precast gel staining)，也可用于后染(post gel staining)。通常后染比前染能夠獲得更靈敏的特性，并能排除染色劑在電泳過程中對核酸條帶分離造成任何影響的可能性。然而，前染較后染更為簡單、經(jīng)濟，因為前染不需要額外的著色過程，并且染料用量更少。因此，假如靈敏度和條帶清晰度不成問題，前染則是首選。我們強烈建議您嘗試兩種染色方法，以便根據(jù)您的需要選擇最佳的染色方法。
概括而言， GelRed 在性能和可操作性方面均超過SYBR或EB。 通常，GelRed 最顯著的特性是其在多種條件下的高靈敏性和穩(wěn)定性。另外，與GelGreen 、 EvaGreen 一樣，相對EB或SYBR，GelRed 誘導突變的能力極低。 權(quán)威實驗室的毒性檢測報告可以從Biotium 網(wǎng)站 ()下載。
Cat#41000（GelRed Nucleic Acid Gel Stain, 10,000X in DMSO）為濃縮的 GelRed溶液。用于前染時，可稀釋10,000倍后使用；用于后染時，建議您稀釋3,300倍后使用，見具體操作步驟。
其它類型的GelRed有：GelRed 10,000X in H2O, 0.5mL (cat# 41003); GelRed 10,000X in DMF, 0.5mL (cat# 41000); and GelRed 3X in H2O, 4L (#cat 41001).

操作步驟：
    1）前染法對DNA染色（precast gel staining）

1.1.    使用標準方法預備瓊脂糖凝膠溶液

1.2.    將GelRedTM 10,000X in DMSO（41000）試劑按1:10000溶于瓊脂糖凝膠溶液中，再用渦旋、攪拌或振搖的方法使染色劑與凝膠溶液充分混合即可。（例如：將5uL GelRedTM 試劑加入50mL 凝膠溶液中）。
由于GelRedTM 具有出色的熱穩(wěn)定性，可將試劑直接加入高溫的凝膠溶液中，而不用等凝膠溶液冷卻后再加入。也可以采用將GelRedTM試劑事先與凝膠粉末混合，然后加入您所使用的緩沖溶液，用常用的制備瓊脂糖凝膠的方法通過微波或其它加熱方法制成。
備注： GelRedTM 適用于所有常用的電泳緩沖溶液。

1.3.    澆制凝膠并使其凝固
剩余的凝膠溶液均可貯存起來，并可以重新加熱澆制另一塊凝膠。由于GelRedTM 水解穩(wěn)定性好(見圖2)，您可以大量制備GelRedTM 凝膠，貯存以備用。為避免形成結(jié)塊，建議預制凝膠4 C冷藏。

1.4.    標準方法載入樣品跑膠
注意：使用這種預先參雜染色劑的瓊脂糖膠體，每次不易加入太多的 DNA 樣品，否則容易造成飽和現(xiàn)象，您可以做多個不同濃度的 DNA 標志（marker），以確定最佳 DNA 加載量。

1.5.    核酸顯色用標準的透視器(302nm)，并用Polaroid 667膠片和EB濾光片拍照。由于熒光處于紅色光區(qū)域，SYBR 或 GelStar濾光片也可用于拍照，得到一樣不錯的結(jié)果。(見圖1 GelRedTM 發(fā)射光譜和激發(fā)光譜)

注意：如果始終出現(xiàn)拖尾或是條帶無法分離的現(xiàn)象，您可以使用后染法對DNA染色，以確認問題是否與染色劑有關(guān)。如果使用后染法問題依舊存在，則說明問題與染色劑無關(guān)，請嘗試： 降低瓊脂糖的含量； 減少核酸的加載量；改善試驗方法和技巧。
通常，GelRed 或 GelGreen 對DNA 的移動所產(chǎn)生的影響比SYBR Green I 更低。如圖3。 

2）后染法對DNA染色（Post Gel Staining）

2.1.    使用標準方法跑膠

2.2.    用含0.1M NaCl的H2O將GelRedTM 10,000X in DMSO（41000）試劑稀釋約3,300倍，制成3X染色溶液。(例如：將15 uL GelRedTM 10,000X試劑和5mL的NaCl加入到45mL H2O中)。

注意：GelRedTM 1X染色溶液同樣可用于后染，但其靈敏度要低于3X染色溶液。

2.3.    將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3X染色溶液浸沒凝膠。

2.4.    在室溫下輕輕地搖動凝膠板，最佳的染膠時間為30 分鐘，這取決于凝膠板的厚度、瓊脂糖或聚丙烯酰胺的濃度和 DNA 的長短。凝膠越厚或瓊脂糖的濃度越高，染色所需要的時間就越長。

備注：染色溶液至少可重復使用2-3次。如果不是立即再用的話，建議將用過的染色溶液冷藏保存。

2.5.    通過標準的透視器(302nm)觀察染色凝膠，用Polaroid 667和EB濾光片拍照。同樣，SYBR 或GelStar 濾光片也可用于拍照，可得到同樣不錯的結(jié)果。
   


圖1. 在TBE緩沖液中GelRedTM結(jié)合 dsDNA之激發(fā)光譜(左)和發(fā)射光譜(右).



圖2.GelRedTM與SYBR Gold穩(wěn)定性比較. GelRed和SYBR Gold 1X TBE 凝膠染色溶液長時間處于室溫下在500nm和488nm的正常吸光率。GelRedTM和SYBR Gold起始吸光率值分別為0.029和 0.051



圖3. dsDNA 的移動距離與其片段大小的關(guān)系圖。分別使用GelRed后染、GelRed、GelGreen、SYBRGreen I 前染。


*GelRedTM 產(chǎn)品及其使用均受美國和國際專利保護
** SYBR是Molecular Probes公司的注冊商標,GelStar是FMC公司的注冊商標
毒性:    最初用一種商業(yè)誘變性測試KIT對GelRedTM進行誘變試驗，GelRedTM在鼠肝浸膏缺失或存在的情況下在移碼的指示菌株TA98中表現(xiàn)出極弱的誘變性。進一步的安全性試驗表明，GelRedTM同樣表現(xiàn)出非常安全的實驗結(jié)果。由于對于化學品，尤其是對于核酸結(jié)合的化學品，建議在操作時還是要仔細謹慎。
權(quán)威實驗室的毒性檢測報告可以從Biotium 網(wǎng)站 ()下載。

處理方法:    每一加侖（～4L）廢棄的染色溶液中加入～100mL的漂白劑（家用漂白劑即可），充分反應8小時以上再倒入下水道。對于預制膠的處理，可以先充分干燥后按正常廢物處理。
急救方法:    這種染色劑存在潛在的危害性。應避免長時間或重復置于光照下。避免接觸眼睛，皮膚或衣服，操作完成后徹底清洗。萬一眼睛或皮膚接觸后立即用大量水沖洗感染部位15分鐘，然后立即就醫(yī)。萬一誤吸或誤吞咽，應立即移至新鮮空氣處并立即就醫(yī)。