Cell-Based ELISA簡介以及應(yīng)用

Cell-Based ELISA（基于細(xì)胞的 ELISA）是一種全新的ELISA技術(shù)，有兩個最突出的優(yōu)點：

 

1.1不需要抽提蛋白、包被微孔板：細(xì)胞直接在微孔板里培養(yǎng)，待檢測的時候，將細(xì)胞固定在微孔板上并進(jìn)行通透處理即可。這樣就避免了抽提蛋白時，由于客觀和主觀上引起樣品的損失而導(dǎo)致實驗結(jié)果在一定程度上偏離了實際情況。同時不用包被微孔板，簡化了實驗流程，有助于提高效率�？蒲腥藛T在一個 96 孔酶聯(lián)板上，便能檢測目標(biāo)細(xì)胞蛋白經(jīng)刺激或抑制作用后的表現(xiàn)。由于省去抽提蛋白和裂解細(xì)胞的步驟，樣本的損失也能降到最低，比起其他普通的 ELISA 測定方法，這項全新的 ELISA 技術(shù)能更快速、更方便地一次檢測大量的細(xì)胞內(nèi)蛋白。

 

1.2  可同時檢測兩種不同蛋白：封閉后加入兩種抗不同蛋白且來源于不同宿主的一抗，然后再加入不同的二抗，加入兩種熒光底物，檢測兩個波長。同時檢測兩種蛋白的好處是顯而易見的，可以減少工作量，此外還可以滿足一些特殊的實驗需要，例如，需要測定某個蛋白的磷酸化比例，就需要測定磷酸化蛋白的數(shù)量和總蛋白的數(shù)量，這兩個測定在同一次實驗進(jìn)行，有助于消除實驗誤差，得到更為精確的實驗結(jié)果。

 

某些公司發(fā)展了雙通道Cell-Based ELISA技術(shù)；

雙通道與單通道Cell-based ELISA比較：

雙通道cell-based ELISA，顧名思義，即一次可以同時檢測兩種目的蛋白，R&D Systems提供的Cell-based ELISA就是雙通道cell-based ELISA，原理略：（需要熒光檢測方式和相應(yīng)儀器）；

 

單通道cell-based ELISA，即一次只能檢測一種目的蛋白，他和普通ELISA的主要區(qū)別在于樣品處理過程：

 

事實上，根據(jù)單通道的cell based elisa 原理，可以自己建立cell based elisa 實驗系統(tǒng)；

細(xì)胞加入培養(yǎng)板中；

加入刺激物或者抑制劑進(jìn)行培養(yǎng)；

對細(xì)胞進(jìn)行固定或者封閉；

加入第一抗體；

加入HRP 結(jié)合的二抗（二抗的選擇，同western blot）；

加入底物進(jìn)行顯色。