植物miRNA及piRNA的逆轉(zhuǎn)錄

miRNA在植物的發(fā)育、抗病、和應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。一般認(rèn)為，這些小的非編碼RNA通過靶向mRNA剪切，在后轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)植物的基因表達(dá)。這些基因表達(dá)中的靶向變化由數(shù)百個成熟miRNA的差異表達(dá)所調(diào)控，每個成熟miRNA結(jié)合在靶mRNA的特定序列上。因此，對植物的成熟miRNA調(diào)控和表達(dá)進(jìn)行分析，能夠?yàn)橹参锏慕M織發(fā)育、干旱保護(hù)及疾病防御機(jī)理提供寶貴信息。目前基本無法通過qRT-PCR對植物的成熟miRNA進(jìn)行分析，由于植物miRNA的特性，基于多聚腺苷酸的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)對其反應(yīng)效率十分低下。QIAGEN推出了獨(dú)特的解決方案，能夠?qū)χ参锝M織中的成熟miRNA進(jìn)行通用的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

QIAGEN miScript Plant RT Kit用于植物miRNA和其他3’端修飾的小RNA的cDNA合成；是針對具有3’端甲基化(2’-O-Me)修飾的小RNA進(jìn)行無偏差 cDNA合成的通用型試劑盒。本試劑盒專為基于實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)的小RNA表達(dá)分析應(yīng)用設(shè)計(jì)和優(yōu)化，能夠配合miScript SYBR Green PCR Kit和miScript miRNA PCR Array或miScript Primer Assay等產(chǎn)品使用。這一類通過功能驗(yàn)證的分析和芯片產(chǎn)品可應(yīng)用于水稻、玉米、大豆、煙草和其他一些重要農(nóng)業(yè)作物的檢測，以及植物學(xué)相關(guān)的研究。在3’末端堿基具有2’-O-Me甲基化修飾的小RNA（如植物成熟miRNA和piwi互作RNA (piRNA)）中，一般不具有poly A尾結(jié)構(gòu)，因此無法通過多聚腺苷酸依賴的cDNA合成方法有效地反轉(zhuǎn)錄。專用的miScript Plant RT Kit通過首先向植物miRNA的3’末端連接一個接頭解決了這一難題。不同于多聚腺苷酸化，這一鏈接反應(yīng)不會受到植物miRNA 3’末端堿基上存在的2’-O-Me甲基化修飾的負(fù)面抑制。接頭一旦連接成功，即可實(shí)現(xiàn)反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

miScript Plant RT Kit與miScript Plant qPCR System的聯(lián)合使用，能夠確保針對植物樣本實(shí)現(xiàn)靈敏和特異性的miRNA檢測和定量工作。由于許多miRNA表達(dá)豐度很低，因此檢測靈敏度對于確保獲得可靠數(shù)據(jù)至關(guān)重要。miScript Plant qPCR System能夠提供優(yōu)異的靈敏度，寬廣的動態(tài)監(jiān)測范圍，以及始終如一的高擴(kuò)增效率。miScript Plant qPCR System的良好性能將幫助您于首次嘗試時(shí)，即在技術(shù)重復(fù)和生物重復(fù)樣本之間獲得高度可重復(fù)的結(jié)果。

反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)可方便地進(jìn)行。通常在連接反應(yīng)介導(dǎo)的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中，一般使用含有3’端2’-O-Me修飾小RNA的總RNA做為起始材料。反轉(zhuǎn)錄是一個簡單直接的操作步驟，包含了37℃下1小時(shí)的溫育反應(yīng)，以及之后在95℃下通過短暫孵育對反應(yīng)進(jìn)行失活。

miScript Plant RT Kit通常做為miScript Plant PCR System的一部分，用于進(jìn)行： 

• 植物成熟miRNA的定量和表達(dá)譜分析
• piRNA的定量和表達(dá)譜分析

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