多功能酶標(biāo)儀技術(shù)的革命——LVF光柵在FRET和BRET分析中的優(yōu)異表現(xiàn)

例如在檢測GFP，mKate，mOrange和CFP-YFP等熒光蛋白時，光柵型酶標(biāo)儀得不到理想的效果，在FRET和BRET等雙發(fā)射分析中更是如此。光柵型酶標(biāo)儀無法實現(xiàn)這些應(yīng)用的一個明顯原因是我們需要30nm以上的帶寬，實際上，在一些BRET分析中我們需要60到100nm的帶寬，而目前傳統(tǒng)的光柵往往只有狹窄的固定的帶寬或者有限可調(diào)的帶寬（不超過30nm），根本無法滿足檢測要求。另一個原因是這些應(yīng)用的信號比較弱，發(fā)射光遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于常用的染料，如FITC或者rhodamine，而光柵的透光效率又遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于濾光片，光強損失太大，勢必降低靈敏度。

LVF光柵的高靈敏度除了因為更寬的帶寬，還有兩個原因，一是LVF光柵是基于濾光片的透射原理而不是傳統(tǒng)光柵的衍射；二是由于光路設(shè)計的不同， LVF光柵通過直接的光學(xué)組件取代光纖來傳導(dǎo)信號（光纖傳導(dǎo)會造成光強的損失）；因此，LVF光柵可以提供比傳統(tǒng)衍射光柵多5到10倍的光線，從而大大提高了靈敏度。目前LVF光柵已經(jīng)被運用于BMG最新一代的多功能酶標(biāo)儀——CLARIOstar。