用TL2020自動(dòng)冷凍研磨儀進(jìn)行玉米葉片液氮研磨的實(shí)驗(yàn)方法

目的：

批量研磨玉米葉片，為后續(xù)提取核酸，進(jìn)行遺傳或生理生化指標(biāo)分析研究提供方便。為種子和農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量管理部門、種子公司等單位利用分子方法檢測(cè)樣品純度、檢測(cè)純度真實(shí)性等實(shí)驗(yàn)所必需的樣品前處理工作提供參考。

地點(diǎn)：某種業(yè)育種和栽培實(shí)驗(yàn)室

材料：新鮮玉米幼苗葉片

儀器：主機(jī)，TL2020自動(dòng)冷凍研磨儀（又名TL2020高通量組織研磨儀）；配件：2ml研磨適配器,直徑3或5mm研磨鋼珠

圖1：TL2020自動(dòng)冷凍研磨儀

步驟：

1）取樣：取新鮮玉米幼苗葉片，剪成直徑6~8mm大小碎片；

2）將3-5片葉片碎片置于2ml離心管（EP管）中，同時(shí)加入1顆5mm和2顆3mm不銹鋼研磨鋼珠。

3）將加入葉片和研磨鋼珠的EP管蓋嚴(yán)密封，放入TL2020自動(dòng)冷凍研磨儀的2ml研磨適配器中，然后和適配器一起整體浸入液氮中冷凍2-3分鐘或至液氮不“沸騰”為止。

4）使用DHS特制的液氮研磨操作提籃迅速?gòu)囊旱�中取出適配器，并迅速將其固定在研磨儀的搖臂中；

5）設(shè)置TL2020的研磨時(shí)間為2分鐘，研磨頻率1500rpm（1500次/分鐘）。

結(jié)果：

得到非常細(xì)碎的葉片粉末，后續(xù)提取核酸效果很好。

結(jié)論：

用TL2020自動(dòng)冷凍研磨儀進(jìn)行玉米葉片的液氮研磨，可以直接將研磨管和適配器浸泡在液氮里，只需一次性1-2分鐘的液氮冷凍處理和一次約2分鐘的研磨，就能批量粉碎多達(dá)56個(gè)2.0ml的樣品（用96孔深孔板的話則是192個(gè)樣品）。處理時(shí)間迅速，有效防止了溫升，為后續(xù)有效提取核酸提供了保障。此外，還大大節(jié)省液氮，操作也更加安全。