什么叫相差顯微鏡？原理和結(jié)構(gòu)特點是什么？

什么叫相差顯微鏡？

(一)相差顯微鏡原理和結(jié)構(gòu)特點

光波有振幅（亮度）、波長（顏色）及相位(指在某一時間上光的波動所能達到的位置)的不同。當(dāng)光通過物體時，如波長和振幅發(fā)生變化，人們的眼睛才能觀察到，這就是普通顯微鏡下能夠觀察到染色標(biāo)本的道理。而活細胞和未經(jīng)染色的生物標(biāo)本，因細胞各部微細結(jié)構(gòu)的折射率和厚度略有不同，光波通過時，波長和振幅并不發(fā)生變化，僅相位有變化(相應(yīng)發(fā)生的差異即相差)，而這種微小的變化，人眼是無法加以鑒別的，故在普通顯微鏡下難以觀察到。能夠改變直射光或衍射光的相位，并且利用光的衍射和干涉現(xiàn)象，把相差變成振幅差(明暗差)，同時它還吸收部分直射光線，以增大其明暗的反差。因此可用以觀察活細胞或未染色標(biāo)本。相差顯微鏡與普通顯微鏡的主要不同之處是：用環(huán)狀光闌代替可變光闌，用帶相板的物鏡(通常標(biāo)有PH的標(biāo)記)代替普通物鏡，并帶有一個合軸用的望遠鏡。環(huán)狀光闌是由大小不同的環(huán)狀孔形成的光闌，它們的直徑和孔寬是與不同的物鏡相匹配的。其作用是將直射光所形成的像從一些衍射旁像中分出來。相板安裝在物鏡的后焦面處，相板裝有吸收光線的吸收膜和推遲相位的相位膜。它除能推遲直射光線或衍射光的相位以外，還有吸收光使亮度發(fā)生變化的作用。調(diào)軸望遠鏡是用來進行合軸調(diào)節(jié)的。相差顯微鏡在使用時，聚光鏡下面環(huán)狀光闌的中心與物鏡光軸要完全在一直線上，必需調(diào)節(jié)光闌的亮環(huán)和相板的環(huán)狀圈重合對齊，才能發(fā)揮相差顯微鏡的效能。否則直射光或衍射光的光路紊亂，應(yīng)被吸收的光不能吸收，該推遲相位的光波不能推遲，就失去了相差顯微鏡的作用。

(二)相差顯微鏡使用方法：相差裝置為多功能系列顯微鏡中的附屬裝置，與普通顯微鏡配合使用。

1．相差裝置的調(diào)換安裝    卸下普通顯微鏡使用的聚光器，將環(huán)狀光闌裝在聚光器支架上，把綠色濾光片放在上面，它可吸收紅色和藍色光，使波長范圍小的單色光線進行照明，并有吸熱作用，能使相差觀察獲得良好的效果。再從轉(zhuǎn)換器上旋下普通物鏡，換上相差物鏡。

2．調(diào)焦    打開光源，旋轉(zhuǎn)集光器轉(zhuǎn)盤，將“o”對準(zhǔn)標(biāo)示孔，使普通聚光器部分進入光路。先使用低倍相差物鏡，按普通顯微鏡操作方法進行對光和調(diào)焦。旋轉(zhuǎn)環(huán)狀光闌，使光闌的直徑和孔寬與所使用的相差物鏡相適應(yīng)，如相差物鏡為40X時應(yīng)用X40標(biāo)示孔的光闌。

3．合軸調(diào)整    拔出目鏡，插入合軸望遠鏡，一邊從望遠鏡內(nèi)觀察，并用左手固定其外筒；一邊用右手轉(zhuǎn)動望遠鏡內(nèi)筒使其下降，當(dāng)對準(zhǔn)焦點就能看到環(huán)狀光闌的亮環(huán)和相板的黑環(huán)，此時可將望遠鏡固定住。再升降集光器并調(diào)節(jié)其下的螺旋使亮環(huán)的大小與黑環(huán)一致，然后左右前后調(diào)節(jié)環(huán)狀光闌聚光器上的調(diào)節(jié)鈕，使兩環(huán)完全重合，如亮環(huán)比黑環(huán)小而位于內(nèi)側(cè)時，應(yīng)降低集光器使亮環(huán)放大；反之，則應(yīng)升高聚光器，使亮環(huán)縮小。如若升到最高限度仍不能完全重合，則可能是載玻片過厚之故，應(yīng)更換。合軸調(diào)整完畢，抽出望遠鏡，換回目鏡，按常規(guī)要領(lǐng)進行觀察。在更換不同倍率的相差物鏡時，每一次都要使用相匹配的環(huán)狀光闌和重新合軸調(diào)整。使用油鏡時，集光器上透鏡表面與載玻片之間要同時加上香柏油。

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