效應(yīng)細(xì)胞功能鑒定和抗體藥物研發(fā)之ADCC分析

一睹免疫細(xì)胞搏殺戰(zhàn)場的風(fēng)采

效應(yīng)細(xì)胞功能鑒定和抗體藥物研發(fā)之ADCC分析

（Celigo全視野細(xì)胞掃描分析儀）

1.ADCC作用

ADCC作用即抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)：指表達(dá)IgGFc受體的NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等，通過與已結(jié)合在病毒感染細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等靶細(xì)胞表面的IgG抗體的Fc段結(jié)合，而達(dá)到殺傷這些靶細(xì)胞的作用。

2.ADCC作用的關(guān)鍵點(diǎn)

1. 效靶比(E:T)：即效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞的比率，是分析ADCC作用的關(guān)鍵因素之一。
2. 抗體濃度：最佳抗體濃度的摸索是ADCC作用的關(guān)鍵因素；
3. 效應(yīng)時(shí)間：最佳效應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的摸索也是ADCC作用的關(guān)鍵因素

3.檢測方法：

全視野細(xì)胞掃描分析儀能多時(shí)間點(diǎn)圖像監(jiān)測和定量分析效應(yīng)細(xì)胞殺死靶細(xì)胞的搏殺戰(zhàn)場。

4.Celigo監(jiān)測實(shí)驗(yàn)流程舉例

1）Calcein AM熒光染料：一種可對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑。

Calcein AM能夠輕易穿透活細(xì)胞膜，進(jìn)入到細(xì)胞質(zhì)后，酯酶會(huì)將其水解為Calcein(鈣黃綠素)留在細(xì)胞內(nèi)，發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。因?yàn)槠浼?xì)胞毒性低，是最適合作為活細(xì)胞的熒光探針。

1. 分析時(shí)，活的靶細(xì)胞被Calcein標(biāo)記，發(fā)出強(qiáng)綠色熒光；如果靶細(xì)胞死亡或裂解，Calcein釋放出來，綠色熒光不再存在。因此可以通過Calcein AM熒光的變化，分析效應(yīng)細(xì)胞對靶細(xì)胞的殺傷作用。

1.）ADCC分析流程：

5.Celigo成像

1）  0h靶細(xì)胞全孔圖像           綠色熒光圖像                 明場+熒光疊加

2）0h靶細(xì)胞計(jì)數(shù)圖像（取局部圖像） 

      綠色熒光細(xì)胞圖像                  圈定的計(jì)數(shù)的細(xì)胞圖像

3）不同時(shí)間點(diǎn)靶細(xì)胞計(jì)數(shù)圖像

            0h                 2h                4h             6h

6.ADCC殺傷公式和殺傷曲線

CAM+_t0: 0h的Calcein AM陽性數(shù)           nCAM+_t: t小時(shí)的Calcein AM陽性數(shù)

                                              ADCC殺傷曲線

7.基于Celigo圖像的Calcein AM法和LDH釋放法對比

8.不同效靶比(E:T)對ADCC作用的影響

                  10:1                 5:1                  2.5:1

             1.3:1                  0.6:1                0.3:1            

9.不同效應(yīng)時(shí)間點(diǎn)搏殺的細(xì)胞圖像

10.不同抗體濃度搏殺的細(xì)胞圖像

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