如何用TL2020組織研磨破碎儀研磨內(nèi)臟及腫瘤細(xì)胞提取RNA

鼎昊源科技通過(guò)大量樣品破碎測(cè)試發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物組織樣品相比其他樣品更難破碎，特別是一些內(nèi)臟組織、結(jié)締組織、心臟肌肉組織、肺部組織，一般很難用手工或者常規(guī)組織勻漿儀徹底破碎。因?yàn)檫@些動(dòng)物組織樣品一般韌性較大，如果使用手工研磨或者組織勻漿儀，不僅一次處理量太少、易污染且難清洗，處理后的樣品還不夠均勻細(xì)致，達(dá)不到后續(xù)提取RNA等實(shí)驗(yàn)的要求。2015年3月 - 4月，北京某生物公司研發(fā)人員使用(又稱TL2020高通量組織研磨儀)研磨內(nèi)臟及腫瘤細(xì)胞，后續(xù)提取RNA，實(shí)驗(yàn)順利，效果很好，以下是本次研磨實(shí)驗(yàn)的主要流程，可供相關(guān)實(shí)驗(yàn)人員參考：

【材料準(zhǔn)備】

·樣品種類：人體腫瘤細(xì)胞、胰腺、前列腺、脂肪、肌肉，每個(gè)組織各研磨2個(gè)樣品，用液氮處理保存。

·研磨配件種類：鼎昊源TL2020組織研磨破碎儀2.0ml研磨管適配器（28×2.0ml）1對(duì)，6mm不銹鋼研磨珠若干顆。

【研磨實(shí)驗(yàn)流程】

1. 高溫滅菌預(yù)處理6mm不銹鋼研磨珠；

2. 將滅菌處理過(guò)的研磨珠與研磨管適配器置入液氮中同時(shí)進(jìn)行預(yù)冷處理；

3. 將樣品從液氮中取出，在研缽中切割成約4-5mm寬的樣品小塊。

4. 在2ml無(wú)菌圓底離心管(進(jìn)口)中依次加入：預(yù)冷6mm研磨鋼珠1顆、切好的樣品塊1塊、預(yù)冷6mm研磨鋼珠1顆。

5. 確保離心管中有2顆6mm研磨鋼珠和1塊樣品塊后，快速蓋好管蓋，對(duì)稱放入預(yù)冷的2.0ml研磨管適配器孔槽中。

6. 將適配器固定在的兩個(gè)搖臂上，設(shè)置轉(zhuǎn)速1800rpm，時(shí)間120S（胰腺樣品180S），一鍵開(kāi)始研磨。

8. 研磨時(shí)間結(jié)束，卸載適配器取出離心管，在管中快速加入裂解液，然后按照后續(xù)RNA提取實(shí)驗(yàn)步驟操作。

【研磨效果】

·后續(xù)成功提取出RNA，且電泳圖條帶清晰可見(jiàn)。

本實(shí)驗(yàn)中，使用一次性高速破碎56個(gè)2ml的內(nèi)臟樣品組織，不僅操作靈活方便，還能安全輕松地進(jìn)行液氮冷凍研磨操作，保證了RNA提取等溫度敏感性后續(xù)實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。此外，用TL2020進(jìn)行類似的動(dòng)物樣品組織研磨，避免了樣品間的交叉污染，省去了清洗儀器的繁瑣工作，對(duì)于樣品量巨大且需要無(wú)菌操作的實(shí)驗(yàn)，無(wú)疑大大提高了效率。