Nanopro 1000 cIEF immunoassay technology：突破腫瘤干細(xì)胞信號通路蛋白研究困局

很多威脅人類生命的惡性腫瘤存在腫瘤干細(xì)胞。腫瘤治療有效的病人，在后期出現(xiàn)復(fù)發(fā)，很大程度上與腫瘤干細(xì)胞未被有效殺傷，及其耐藥性有關(guān)。越來越多的臨床科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有的腫瘤治療藥物，可能只對腫瘤細(xì)胞自身有效，而對于腫瘤干細(xì)胞無效。

近年越來越多的腫瘤臨床醫(yī)生和藥物研發(fā)企業(yè)開始啟動針對腫瘤干細(xì)胞新藥物的研發(fā)。但是很快很多研究者遇到了一個難題，腫瘤干細(xì)胞資源非常少。與腫瘤細(xì)胞系不同，腫瘤干細(xì)胞需要從腫瘤病人血液或臨床穿刺組織樣品中分離，一些樣本只能分離到10000以內(nèi)的細(xì)胞。之前，藥物開發(fā)者無法找到一種足夠靈敏的蛋白質(zhì)分析技術(shù)，檢測新化合物處理的腫瘤干細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)量及修飾的改變，尤其是關(guān)鍵蛋白的修飾變化。而關(guān)鍵蛋白修飾改變通�？梢苑磻�(yīng)干細(xì)胞是否對新的化合物有反應(yīng)，是腫瘤干細(xì)胞藥物篩選的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

2015年1月份英國兩所全球排名前100位的著名大學(xué)曼徹斯特大學(xué)和格拉斯哥大學(xué)，聯(lián)合在國際頂尖雜志Nature發(fā)表了他們在腫瘤干細(xì)胞蛋白質(zhì)修飾變化研究方法的文章。突破了腫瘤干細(xì)胞無法有效進(jìn)行蛋白質(zhì)修飾分析的瓶頸。

負(fù)責(zé)這項研究的是曼徹斯特大學(xué)血液腫瘤干細(xì)胞蛋白質(zhì)組研究中心和格拉斯哥大學(xué)血液腫瘤研究中心。

兩個中心的科學(xué)家從慢性髓性白血病病人樣本中，使用流式細(xì)胞儀分選得到CD34+CD38−原始祖細(xì)胞和CD34+CD38+定向祖細(xì)胞，使用達(dá)沙替尼和甲磺酸伊馬替尼進(jìn)行處理，使用Proteinsimple 的Nanopro 1000系統(tǒng)檢測細(xì)胞裂解液中蛋白CrkL 修飾圖譜。在文中，作者指出Nanopro 1000 cIEF immunoassay technology 是一種非常有效的，可以定量出每個修飾異構(gòu)體在總CrkL蛋白中百分比，且重復(fù)性非常好技術(shù)。后續(xù)作者繼續(xù)使用了1.6ng總蛋白，檢測pS962 PTPRC/CD45和PTPRC/CD45，，發(fā)現(xiàn)CV分別在7.82，4.41，重復(fù)性非常好。

Nanopro 1000 cIEF immunoassay technology 是美國proteinsimple公司開發(fā)的，基于毛細(xì)管等電聚焦分離，使用獨創(chuàng)蛋白質(zhì)捕獲技術(shù)，結(jié)合抗原抗體免疫雜交，實現(xiàn)在納升級反應(yīng)體系中，對干細(xì)胞等微量樣品進(jìn)行蛋白質(zhì)修飾圖譜進(jìn)行解讀。該系統(tǒng)具有全自動化，無需手工操作，可實現(xiàn)19小時內(nèi)對96個樣品進(jìn)行分析的強(qiáng)大功能。