FISH熒光原位雜交技術簡介

FISH熒光原位雜交技術：1969年，Gall和Pardue等首次將同位素探針用于原位雜交實驗，獲得成功。1987年，染色體原位抑制雜交法的創(chuàng)建，使FISH技術得以迅速發(fā)展。隨后，Cremer等用生物素和汞或氨基乙酰熒光素等非放射性物質標記探針，創(chuàng)立了雙色FISH熒光原位雜交技術 。1990年，Nederlof等用3種熒光素成功探測出了3種以上的靶位DNA序列，從而宣告了多色FISH技術的問世。

FISH熒光原位雜交技術是一種非放射性分子遺傳學實驗技術，其基本原理是將直接與熒光素結合的寡聚核苷酸探針或采用間接法用生物素、地高辛等標記的寡聚核苷酸探針與變性后的染色體、細胞或組織中的核酸按照堿基互補配對原則進行雜交，經變性-退火-復性-洗滌后即可形成靶DNA 與核酸探針的雜交體，直接檢測或通過免疫熒光系統(tǒng)檢測，最后在熒光顯微鏡下顯影，即可對待測DNA進行定性、定量或相對定位分析。

【FISH熒光原位雜交基本原理】
熒光原位雜交技術問世于70年代后期，其曾多用于染色體異常的研究，近年來隨著FISH所應用的探針鐘類的不斷增多，特別是全Cosmid探針及染色體原位抑制雜交技術的出現(xiàn)，使FISH技術不僅在細胞遺傳學方面，而且還廣泛應用于腫瘤學研究，如基因診斷基因定位等。

原有的放射性同位素原位雜交技術存在著較多缺點，諸如每次檢驗均 需重新標記探針，已標記的探針表現(xiàn)出明顯的不穩(wěn)定性，需要較和時間的曝光時間和對環(huán)境的污染等。在觀察結果時，需要較多的分裂進行統(tǒng)計學分析。>>>勝創(chuàng)生物。

此外，由于放射性銀粒和染色體聚集的不同平面，可能引起計數(shù)上的誤差等。與之比FISH則具有①操作操作簡便，探針標記后穩(wěn)定，一次標記后可使用二年②方法敏感，能迅速得到結果③在同一標本上，可同時檢測幾種不同探針④不僅可用于分裂期細胞染色體數(shù)量或結構變化的研究，而且還可用于間期細胞的染色體數(shù)量及基因改變的研究等特點。

熒光原位雜交技術是一種重要的非放射性原位雜交技術。它的基本原理是：如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補的，二者經變性-退火-復性，即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標記上報告分子如生物素、地高辛，可利用該報告分子與熒光素標記的特異親和素之間的免疫化學反應，經熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進行定性、定量或相對定位分析。

【熒光原位雜交技術優(yōu)勢】
FISH技術有以下幾點優(yōu)勢：① 安全、快速、靈敏度高；② 探針能較長時間保存；③ 多色標記，簡單直觀；④ 可用于中期染色體及間期細胞的分析；⑤ 可應用于新鮮、冷凍或石蠟包埋標本以及穿刺物和脫落細胞等多種物質的檢測。

【熒光原位雜交技術應用領域】
該技術不但可用于已知基因或序列的染色體定位，而且也可用于未克隆基因或遺傳標記及染色體畸變的研究。在基因定性、定量、整合、表達等方面的研究中頗具優(yōu)勢。FISH應用領域包括臨床應用 、在細胞遺傳學研究的應用 、在基因圖譜繪制的應用 、用于基因擴增的檢測。