BCA蛋白定量方案—最便宜的BCA蛋白定量分析試劑盒技術(shù)說(shuō)明

精確的蛋白質(zhì)定量是蛋白質(zhì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)所必需的，這些實(shí)驗(yàn)涉及分子生物學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)，生物化學(xué)，發(fā)育生物學(xué)和神經(jīng)科學(xué)的研究課題。 最常用的蛋白質(zhì)定量分析方法主要是BCA法和Bradford法。 基于Bradford法的原理，會(huì)由于各種蛋白質(zhì)中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)測(cè)定時(shí)有較大的偏差，而且容易受到去污劑（Triton X-100、SDS…）的干擾。所以更多的權(quán)威機(jī)構(gòu)和客戶會(huì)選擇BCA法檢測(cè)蛋白濃度，例如，F(xiàn)DA指定BCA試劑盒為新藥申報(bào)材料中蛋白質(zhì)檢測(cè)的唯一標(biāo)準(zhǔn)試劑。

BCA法實(shí)驗(yàn)原理：堿性條件下，蛋白質(zhì)分子中的肽鍵結(jié)構(gòu)能與Cu2+結(jié)合生成紫色絡(luò)合物，同時(shí)將Cu2+還原為Cu+。BCA試劑可靈敏特異的與Cu+結(jié)合，形成穩(wěn)定的有顏色的絡(luò)合物，562nm處有最高的吸收值，可在540-595nm測(cè)定其吸收值，顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，即可計(jì)算待測(cè)蛋白的濃度。

Biovision的常規(guī)BCA蛋白定量試劑盒的優(yōu)點(diǎn)：
· 實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，便捷；
· 靈敏度高，檢測(cè)濃度下限達(dá)到25μg/ml；
· 測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的去污劑等化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容SDS、Triton X-100以及Tween 20等；
· 在20-2000μg/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系；
· 檢測(cè)不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)小于Bradford法蛋白定量；
· 性價(jià)比無(wú)與倫比，單次實(shí)驗(yàn)費(fèi)用比國(guó)產(chǎn)試劑盒更低。

圖1. 高濃度還原劑條件下，Biovision試劑盒（）的優(yōu)異表現(xiàn)