影響花藥培養(yǎng)的主要因素
花藥培養(yǎng)是用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，把發(fā)育到一定階段的花藥，通過(guò)無(wú)菌操作技術(shù)，接種在人工培養(yǎng)基上，以改變花藥內(nèi)花粉粒的發(fā)育程序，誘導(dǎo)其分化，并連續(xù)進(jìn)行有絲分裂，形成細(xì)胞團(tuán)，進(jìn)而形成一團(tuán)無(wú)分化的薄壁組織——愈傷組織，或分化成胚狀體，隨后使愈傷組織分化成完整的植株。影響花藥培養(yǎng)的因素包括以下5個(gè)方面。
1、基本培養(yǎng)基
基本培養(yǎng)基的選擇因植物種類和品種而異。MS培養(yǎng)基和H培養(yǎng)基適合雙子葉植物花藥培養(yǎng)；B5培養(yǎng)基適合豆科與十字花科植物花藥培養(yǎng)；Nitsch培養(yǎng)基適合蕓薹屬和曼佗羅屬植物花藥培養(yǎng)；而禾谷類植物的花藥培養(yǎng)常采用N6、C17和W14等培養(yǎng)基。
基本培養(yǎng)基的選擇因植物種類和品種而異。MS培養(yǎng)基和H培養(yǎng)基適合雙子葉植物花藥培養(yǎng)；B5培養(yǎng)基適合豆科與十字花科植物花藥培養(yǎng)；Nitsch培養(yǎng)基適合蕓薹屬和曼佗羅屬植物花藥培養(yǎng)；而禾谷類植物的花藥培養(yǎng)常采用N6、C17和W14等培養(yǎng)基。
2、無(wú)機(jī)鹽
培養(yǎng)基中高濃度的銨離子顯著抑制花粉愈傷組織形成。鐵鹽對(duì)花粉胚狀體發(fā)育很重要，如在Fe-EDTA濃度小于40μmol/L的低鐵或無(wú)鐵培養(yǎng)基上，煙草花粉胚只形成多細(xì)胞原胚體（球形胚）便停止發(fā)育。
培養(yǎng)基中高濃度的銨離子顯著抑制花粉愈傷組織形成。鐵鹽對(duì)花粉胚狀體發(fā)育很重要，如在Fe-EDTA濃度小于40μmol/L的低鐵或無(wú)鐵培養(yǎng)基上，煙草花粉胚只形成多細(xì)胞原胚體（球形胚）便停止發(fā)育。
3、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑
生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類與濃度對(duì)花粉的啟動(dòng)、分裂、分化具有關(guān)鍵的作用。細(xì)胞分裂素也椰汁促進(jìn)花粉分化成胚狀體，生長(zhǎng)素類尤其2，4-D促進(jìn)愈傷組織形成，但2，4-D抑制愈傷組織分化成胚狀體。高濃度生長(zhǎng)素甚至可引起茄科花粉胚狀體轉(zhuǎn)化為愈傷組織。因此，誘導(dǎo)愈傷組織分化成苗，應(yīng)將其轉(zhuǎn)入無(wú)2，4-D或含有低濃度IAA，NAA與較高濃度細(xì)胞分裂素的分化培養(yǎng)基上。煙草、水稻等少數(shù)植物的花藥可在不含生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上形成愈傷組織或花粉胚。
生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類與濃度對(duì)花粉的啟動(dòng)、分裂、分化具有關(guān)鍵的作用。細(xì)胞分裂素也椰汁促進(jìn)花粉分化成胚狀體，生長(zhǎng)素類尤其2，4-D促進(jìn)愈傷組織形成，但2，4-D抑制愈傷組織分化成胚狀體。高濃度生長(zhǎng)素甚至可引起茄科花粉胚狀體轉(zhuǎn)化為愈傷組織。因此，誘導(dǎo)愈傷組織分化成苗，應(yīng)將其轉(zhuǎn)入無(wú)2，4-D或含有低濃度IAA，NAA與較高濃度細(xì)胞分裂素的分化培養(yǎng)基上。煙草、水稻等少數(shù)植物的花藥可在不含生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上形成愈傷組織或花粉胚。
4、蔗糖
蔗糖作為碳源和調(diào)節(jié)培養(yǎng)基滲透勢(shì)的物質(zhì)，其濃度對(duì)花粉愈傷組織誘導(dǎo)率有一定的影響，例如誘導(dǎo)油菜、煙草花粉愈傷組織或胚狀體的適宜蔗糖濃度是2%-3%，水稻則是4%-8%，甘蔗則高達(dá)20%，但對(duì)大多數(shù)植物來(lái)說(shuō)是2%-4%。在許多植物花藥和花粉培養(yǎng)中，誘導(dǎo)花粉形成愈傷組織階段，宜采用較高濃度蔗糖，而愈傷組織分化成苗階段宜用較低濃度的蔗糖。
蔗糖作為碳源和調(diào)節(jié)培養(yǎng)基滲透勢(shì)的物質(zhì)，其濃度對(duì)花粉愈傷組織誘導(dǎo)率有一定的影響，例如誘導(dǎo)油菜、煙草花粉愈傷組織或胚狀體的適宜蔗糖濃度是2%-3%，水稻則是4%-8%，甘蔗則高達(dá)20%，但對(duì)大多數(shù)植物來(lái)說(shuō)是2%-4%。在許多植物花藥和花粉培養(yǎng)中，誘導(dǎo)花粉形成愈傷組織階段，宜采用較高濃度蔗糖，而愈傷組織分化成苗階段宜用較低濃度的蔗糖。
5、附加物
添加天然有機(jī)物如水解乳蛋白、水解酪蛋白、椰子汁、酵母提取液等，是對(duì)基本培養(yǎng)基組成成分和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的補(bǔ)充，可提高花粉愈傷組織和胚狀體誘導(dǎo)率，對(duì)促進(jìn)其生長(zhǎng)有良好的效果。此外，活性炭也能促進(jìn)胚狀體發(fā)育，提高花粉植株產(chǎn)量，且已經(jīng)在煙草、油菜、馬鈴薯等植物中被先后證實(shí)。
添加天然有機(jī)物如水解乳蛋白、水解酪蛋白、椰子汁、酵母提取液等，是對(duì)基本培養(yǎng)基組成成分和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的補(bǔ)充，可提高花粉愈傷組織和胚狀體誘導(dǎo)率，對(duì)促進(jìn)其生長(zhǎng)有良好的效果。此外，活性炭也能促進(jìn)胚狀體發(fā)育，提高花粉植株產(chǎn)量，且已經(jīng)在煙草、油菜、馬鈴薯等植物中被先后證實(shí)。
NAA http:///cn/br/Medium/04/Medium8749369023027889.htm
2，4-D http:///cn/br/bm/01/P266600.htm
MS培養(yǎng)基 http:///cn/br/Medium/02/P215750.htm
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