國(guó)際專(zhuān)利RFect小核酸siRNA轉(zhuǎn)染試劑/miRNA轉(zhuǎn)染試劑使用說(shuō)明書(shū)

貨    號(hào)：11011: 0.5ml

          11012: 1.0ml                                     儲(chǔ)存條件：-20℃

          11013: 1.5ml 

產(chǎn)品特點(diǎn)  

◎卓越的細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽(yáng)性率高達(dá)90%以上，基因敲除效果明顯，A549細(xì)胞Lamin A/C 基因敲除效率在95%以上

◎極低的細(xì)胞毒性：轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%，大大降低了因細(xì)胞毒性對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

◎轉(zhuǎn)染細(xì)胞范圍廣，絕大多數(shù)貼壁細(xì)胞株都能獲得比較理想的轉(zhuǎn)染結(jié)果

應(yīng)  用

◎siRNA轉(zhuǎn)染

◎antisense RNA轉(zhuǎn)染

◎200bp內(nèi)的小分子DNA轉(zhuǎn)染

產(chǎn)品介紹 

RFect小核酸轉(zhuǎn)染試劑是國(guó)際知名科學(xué)家崔坤元博士領(lǐng)導(dǎo)我公司研發(fā)團(tuán)隊(duì)在美國(guó)西雅圖實(shí)驗(yàn)室研發(fā)成功的一種新型的小核酸轉(zhuǎn)染試劑。RFect可用來(lái)轉(zhuǎn)染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以?xún)?nèi)的小分子RNA和DNA，轉(zhuǎn)染細(xì)胞包括絕大多數(shù)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，如一般細(xì)胞株、腫瘤細(xì)胞株等。目前，無(wú)論國(guó)外還是國(guó)內(nèi)，轉(zhuǎn)染試劑的主要成分均為脂質(zhì)體或聚乙烯亞胺(Polyethylenimine, PEI)，這兩種成分都具有很大的細(xì)胞毒性，并且轉(zhuǎn)染效果不好。RFect采用新型的動(dòng)物源性的納米材料，毒性很低并且擁有非常卓越的轉(zhuǎn)染性能。與其它品牌的小核酸轉(zhuǎn)染試劑相比，RFect的細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽(yáng)性率一般在90%以上，Lamin A/C 基因抑制效率在95%以上，而其它品牌轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽(yáng)性率一般不超過(guò)70%，Lamin A/C 基因抑制效率不超過(guò)75%。RFect細(xì)胞毒性很低，轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%，而其它品牌試劑的轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率一般在30%以上。血清對(duì)轉(zhuǎn)染效果沒(méi)有影響，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液。有關(guān)RFect 小核酸轉(zhuǎn)染試劑的材料合成和試劑配制我們已申請(qǐng)了國(guó)際專(zhuān)利，并通過(guò)PCT覆蓋國(guó)際上多個(gè)國(guó)家和地區(qū)。

操作步驟：本說(shuō)明書(shū)適用于24孔培養(yǎng)板的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，其他規(guī)格的培養(yǎng)板的用量參照下面表格，表格給出的是每孔的用量與體積。

A. 細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞，每孔 500 μl 培養(yǎng)基（不可加抗生素），使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時(shí)密度在30-50% 。

B. siRNA-RFect混合物準(zhǔn)備：

1. 6pmol siRNA 用50μl無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋。
2. 2μl RFect用50μl無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋。輕輕混勻，室溫孵育5min。注意：確保在25 min內(nèi)執(zhí)行第三步操作，不要過(guò)于延遲。
3. 孵育5min后，將siRNA 稀釋液與RFect 稀釋液混合（總體積100μl）。輕輕混勻，室溫孵育20 min。

C. 將混合物加到培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)（完全培養(yǎng)基培養(yǎng)）：

1. 將100μl混合物加入培養(yǎng)孔內(nèi)，培養(yǎng)孔內(nèi)含有0.5ml培養(yǎng)的細(xì)胞。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板，混勻。
2. 37°C培養(yǎng)18-72h，檢測(cè)基因抑制效果。如果需要，細(xì)胞培養(yǎng)4-6h時(shí)可以更換培養(yǎng)基，但不是必須。孵育時(shí)間的長(zhǎng)短，取決于細(xì)胞類(lèi)型、

所干擾基因本身及分析方法�？稍O(shè)置不同的孵育時(shí)間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以確定最佳孵育時(shí)間。

轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：

• 轉(zhuǎn)染過(guò)程不可添加抗生素，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡；
• 首次實(shí)驗(yàn)siRNA的用量可稍大（一般10 nM） ，后續(xù)實(shí)驗(yàn)根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果修改。

轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)優(yōu)化: 為了提高轉(zhuǎn)染效率，最好對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化，特別是首次使用。例如：24孔培養(yǎng)板，調(diào)整 siRNA與RFect試劑的用量。siRNA 用量在0.6-30 pmol(final concentration 1- 50 nM)之間調(diào)整，RFect試劑用量在1.0 - 3.0μl之間調(diào)整。客戶(hù)可按照習(xí)慣用量進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，如實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想，可適當(dāng)調(diào)整并摸索轉(zhuǎn)染試劑用量。

儲(chǔ)存和運(yùn)輸

藍(lán)冰運(yùn)輸，4°C 保存，長(zhǎng)期不用于-20°C 儲(chǔ)存，避免反復(fù)凍融  

有效期

-20℃保存條件下，有效期為1年

質(zhì)量控制

本產(chǎn)品經(jīng)嚴(yán)格的質(zhì)量檢驗(yàn)證明，無(wú)生物污染

注意：本產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)

常州百代生物科技有限公司

地址：常州市東方東路51號(hào)新東方物流園   電話(huà): 0519-88050392-607    傳真: 0519-83382790