慢病毒行業(yè)新標準——絕對定量滴度測定

瀏覽次數(shù)：4315　發(fā)布日期：2016-3-29　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責任自負

絕對定量時代——引領(lǐng)慢病毒行業(yè)新標準

高大上的慢病毒是怎樣煉成的（一）

慢病毒活性滴度用什么單位？

看TU！看TU！看TU！

TU=transducing units，即每毫升中含有的具有生物活性的病毒顆粒數(shù)。其他的VG/mL，VP/mL都是所有病毒顆粒數(shù)，死的活的都算上，一片虛假繁榮，請自由玩兒去！

慢病毒活性滴度怎么標定最準？

絕對定量！絕對定量！絕對定量！

又絕對又定量的方法，準到不要不要的！再說了，這“絕對定量”是醫(yī)療級病毒產(chǎn)品的公認滴度檢測方法，諾華、Juno，這些CarT大佬們都用！不準？不準的話FDA能認嗎？

復雜又昂貴的方法，為了準，咱們?nèi)汤玻?BR>1.標準品檢定繪制標準曲線，精確定量病毒基因組DNA拷貝數(shù)
2.測定插入細胞基因組的5’LTR—3’LTR病毒基因組拷貝數(shù)
3.工具細胞 293T基因組中的病毒特征單拷貝基因A和宿主特征單拷貝基因B
4.TU=N*C/V=（初始細胞/感染病毒體積）×（2×A基因拷貝/B基因拷貝），計算感染效率
5.不要反轉(zhuǎn)錄，不要受RNA降解或反轉(zhuǎn)錄效率影響。
6.如果病毒有熒光或者抗性，再結(jié)合表型聯(lián)合判斷

準！準！準！重復性杠杠滴！

處女座實驗狗都無法抵抗的滴度標定方法！

慢病毒滴度標那么準，有用嗎？

我！@#￥%&*……

有人問我，為啥我的細胞用慢病毒一感就死？

為啥我的細胞用慢病毒感染后會出現(xiàn)小黑點？

很可能是，過感染啦！過感染啦！過感染啦！

有木有先做預實驗確定細胞的MOI？有沒有根據(jù)病毒滴度準確計算病毒用量？

越是高濃度高純度的病毒，越是需要精確計算滴度，以避免感染不足或者過量感染，保證最好的細胞狀態(tài)，以繼續(xù)下游實驗，這樣才能省時省力省病毒啊啊啊�。�！

最后，附贈感染預實驗步驟詳解，請叫我雷鋒！