常州百代生物RFect原代細(xì)胞小核酸siRNA轉(zhuǎn)染試劑/miRNA轉(zhuǎn)染試劑使用說(shuō)明書(shū)

RFect^PM原代細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑（RFect原代細(xì)胞小核酸siRNA轉(zhuǎn)染試劑/miRNA轉(zhuǎn)染試劑）                                                       

貨    號(hào)：BIOG-11014: 0.5ml

          BIOG-11015: 1.0ml                                          

儲(chǔ)存條件：-20℃

BIOG-11016: 1.5ml

產(chǎn)品介紹 

RFect^PM原代細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑是我公司美國(guó)研發(fā)團(tuán)隊(duì)在RFect細(xì)胞株小核酸轉(zhuǎn)染試劑的基礎(chǔ)上加以改進(jìn)研發(fā)成功的專門用于原代細(xì)胞和懸浮細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染的試劑。RFect^PM可用來(lái)轉(zhuǎn)染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以內(nèi)的小分子RNA和DNA，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。目前，無(wú)論國(guó)外還是國(guó)內(nèi)，原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞的核酸轉(zhuǎn)染都是個(gè)熱點(diǎn)難題，市場(chǎng)還缺乏真正有效的商品化的原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑。RFect^PM能夠高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞和懸浮細(xì)胞，獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對(duì)一些活體寄生蟲(chóng)幼蟲(chóng)，RFect^PM也能獲得較為理想的轉(zhuǎn)染結(jié)果。對(duì)于大多數(shù)原代細(xì)胞，RFect^PM的細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽(yáng)性率都在80%以上，而轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%。RFect^PM的使用也極其簡(jiǎn)便，先將sRNA與RFect^PM室溫混合，再將siRNA-RFect^PM混合物直接加入含培養(yǎng)基的細(xì)胞，血清對(duì)轉(zhuǎn)染效果沒(méi)有影響，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液。有關(guān)RFect^PM原代細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑的材料合成和試劑配制我們已申請(qǐng)了國(guó)際專利，并通過(guò)PCT覆蓋國(guó)際上多個(gè)國(guó)家和地區(qū)。

A. 細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞，每孔 500 μl 培養(yǎng)基（不可加抗生素），使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時(shí)密度在30-50% 。

B. siRNA-RFect^PM混合物準(zhǔn)備：

1. 6pmol siRNA 用50μl無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋。
2. 2μl RFect^PM用50μl無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋。輕輕混勻，室溫孵育5min。注意：確保在25 min內(nèi)執(zhí)行第三步操作，不要過(guò)于延遲。
3. 孵育5min后，將siRNA 稀釋液與RFect^PM稀釋液混合（總體積100μl）。輕輕混勻，室溫孵育20 min。

C. 將混合物加到培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)（完全培養(yǎng)基培養(yǎng)）：

1. 將100μl混合物加入培養(yǎng)孔內(nèi)，培養(yǎng)孔內(nèi)含有0.5ml培養(yǎng)的細(xì)胞。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板，混勻。
2. 37°C培養(yǎng)18-72h，檢測(cè)基因抑制效果。如果需要，細(xì)胞培養(yǎng)4-6h時(shí)可以更換培養(yǎng)基，但不是必須。孵育時(shí)間的長(zhǎng)短，取決于細(xì)胞類型、

所干擾基因本身及分析方法�？稍O(shè)置不同的孵育時(shí)間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以確定最佳孵育時(shí)間。

轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)優(yōu)化: 為了提高轉(zhuǎn)染效率，最好對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化，特別是首次使用。例如：24孔培養(yǎng)板，調(diào)整 siRNA與RFect^PM試劑的用量。siRNA用量在0.6-30 pmol (final concentration 1- 50 nM)之間調(diào)整，RFect^PM試劑用量在1.0 - 3.0μl之間調(diào)整。

轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)

• 轉(zhuǎn)染過(guò)程不可添加抗生素，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡；
• 首次實(shí)驗(yàn)siRNA的用量可稍大（一般10 nM） ，后續(xù)實(shí)驗(yàn)根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果修改。

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