酸棗仁湯對高架十字迷宮大鼠行為學(xué)影響的量效關(guān)系評價機制

 

1．2．2DZP(DiazepamTablets，***片)：京衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1996)第154011號，北京益民制藥廠出品。***36片，研缽粉碎后以雙蒸水溶解，加入2％羧甲基纖維素鈉1～2滴充分混勻，配成10％濃度。4攝氏度保存，使用前混搖均勻。

1．3行為學(xué)測試儀器大鼠高架十字迷宮(EPM)：采用國際通用方法制作。由兩個相對的開放臂(openaim，長X寬分別為50cmX10cm)、兩個相對的封閉臂(enclosedarm，closeaITI1，長X寬×高分別為50cm×10cm×40cm)、一個連接四只臂的中央平臺(centralplatform，10cm×10cm)(即：開放臂一中央平臺一開放臂或封閉臂一中央平臺一封閉臂，此二者互相垂直成為“十”(plus)形狀)和圍繞在開放臂邊緣的1cm高的矮擋板組成(目的是防止動物在探究過程中不慎滑下迷宮)。本迷宮由國產(chǎn)有機玻璃制作(8mm厚，北京眾實迪創(chuàng)科技發(fā)展有限責(zé)任公司提供).有機玻璃部分整體固定于(由黑色等長寬的“十”木架和不銹鋼可升降底座組成的)支架上，使迷宮底板調(diào)節(jié)到距實驗室地面50cm處。

2．1動物處置及分組大鼠每籠7～8只，不限食水。光照節(jié)律12L：12D(6：00～18：00)，室溫(18±2)℃，保持安靜。將大鼠隨機分為空白對照、DZP、SZRTI、II、m、IV共6組，每組15只。其中中藥I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別按3．75g／kg／d、7．5g／kg／d、15g／kg／d、30g／kg／d給予SZRT灌胃，DZP組給予1mg／kg灌胃，空白對照組灌服等容積的生理鹽水。各組連續(xù)給藥10d，于第10d在末次給藥2h后8：o0～14：00Am做行為測試。所有動物均提前2h進入測試實驗室。

2．2行為學(xué)測試

2．2．1測試條件實驗室內(nèi)光線昏暗(以1．5m距離處能區(qū)分大鼠細微活動的最低亮度為準(zhǔn))并保持恒亮，室溫20~C左右，保持安靜。測試箱放置于實驗室一角，周圍布以2m高黑色單調(diào)背景。實驗過程中有一名人員搬運動物，2名事先經(jīng)過實驗記錄培訓(xùn)但不熟悉分組情況的人員在距離測試箱1．5m處分別觀察記錄動物的活動。

2．2．2測試指標(biāo)迷宮測試前將每只大鼠放入一個60cm×60cm×35cm塑料盒中，任其自由探究5min后迅速置于EPM的中央平臺處，使其頭部正對其中一個開放臂，釋放后即開始記錄下述指標(biāo)：①進入開放臂次數(shù)(openarlnentry，OE)：進入到任一開放臂的次數(shù)，以大鼠四個爪子均進入到臂內(nèi)為準(zhǔn)，中途一個爪子從該臂中完全退出則為該次進入活動完成；②進入開放臂時間(openarlntime，OT)：進入開放臂的時間，單位：秒；③進入封閉臂次數(shù)(cl0seariBentry，CE)：進入到任一封閉臂的次數(shù)，以大鼠四個爪子均進入到臂內(nèi)為準(zhǔn)；④進入封閉臂時間(cl0searlntime，CT)：進入封閉臂的時間，單位：秒；⑤向下探究次數(shù)(head—dipping)：大鼠置身于中央平臺或開放臂時，一邊用前爪握住迷宮邊緣一邊把頭部和肩部伸出開放臂的邊緣向迷宮下面探究的行為次數(shù)；⑥封閉臂后腿直立次數(shù)(rearing)：大鼠在封閉臂前腿抬起以后腿支持使身體豎立的次數(shù)。由①～④分別計算出：①進入開放臂和封閉臂的總次數(shù)(OE+CE)：表示大鼠的運動活力(1ocomotoractivitv)：②進入開放臂次數(shù)比例(OE％)：即開放臂進入次數(shù)／(OE+CE)×100％；③開放臂停留時間比例(OT％)，即開放臂停留時間／(OT十CT)×100％。每只大鼠測試5min。中間用濕布擦拭迷宮，清除糞便，繼用干布擦凈后再進行下一只大鼠的測試。

 

2．3數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理所得數(shù)據(jù)均用SPSSl1．0forwindows軟件統(tǒng)計處理，采用單因素方差分析(one—wayANOVA)進行檢驗。

 

酸棗仁湯(SZRT)現(xiàn)代臨床除治療失眠癥外，還用于以情緒或神志障礙為主要表現(xiàn)的精神神經(jīng)系統(tǒng)疾病。焦慮癥是一種以廣泛和持續(xù)焦慮或反復(fù)發(fā)作的驚恐不安為主要特征的神經(jīng)癥，常伴以頭暈、胸悶、心悸等植物神經(jīng)功能癥狀和運動性緊張，一般屬于中醫(yī)“心神不寧”的范疇，臨證可從調(diào)神角度辨治。SZRT具有養(yǎng)心安神、清熱除煩功效，與目前中醫(yī)治療焦慮癥的基本治法相吻合，其在精神疾病方面的臨床有效運用也提示本方可能具有潛在的抗焦慮效用。

 

本研究引入的高架十字迷宮模型，為抗焦慮研究中公認(rèn)的非條件反射模型。它利用動物對新異環(huán)境的探究特性相對高懸敞開臂的恐懼心理，形成動物的矛盾行為，實驗指標(biāo)以進入開放臂的百分?jǐn)?shù)(OE％)和在開放臂停留時間的百分?jǐn)?shù)(OT％)反映動物的焦慮狀態(tài)，焦慮動物的OE％和OT％明顯降低，經(jīng)典抗焦慮藥物則使兩者升高；開放臂和中央平臺區(qū)head—dipping次數(shù)則反映了在非保護區(qū)內(nèi)的探索行為，代表動物對陌生環(huán)境的好奇探究或因恐懼而尋求逃避，與焦慮程度有一定相關(guān)性；開放臂和封閉臂總進入次數(shù)反映動物總的運動能力，封閉臂rearing值也可用來觀察藥物有無鎮(zhèn)靜作用及鎮(zhèn)靜強度，但多年來關(guān)于抗焦慮藥究竟如何影響這兩個指標(biāo)一直存在爭議。

 

本實驗觀察到：SZRT7．5g／kg可顯著增加EPM大鼠OE％和OT％值，明顯提高大鼠在開放臂和中央平臺區(qū)head—dipping次數(shù)及封閉臂的rearing值；15g／kgSZRT可增加EPM大鼠OE％和head—dipping次數(shù)，但對OT％影響不明顯；與空白對照組比較，SZRT3．75g／kg、30g／kg對OE％、OT％、head．dipping和rearing影響均不明顯。實驗結(jié)果表明：SZRT在7．5g／kg～15g／kg劑量范圍內(nèi)，具有一定的抗焦慮效應(yīng)，與DZP的作用方向一致，從對EPM大鼠各項指標(biāo)影響結(jié)果看，以7．5g／kg劑量效果最優(yōu)，而在3．75／kg及3Og／kg劑量時SZRT幾乎不表現(xiàn)抗焦慮效用。

 

本研究證實：中藥酸棗仁湯確有抗焦慮作用．從小劑量開始此效用逐漸增強，但達到一定劑量后，抗焦慮效應(yīng)并不再伴隨劑量的增加而增強，這與一般化學(xué)藥物所遵循的量效關(guān)系規(guī)律不同，其發(fā)生機制尚有待進一步研究。