Dr.J來談?wù)劇瓣P(guān)節(jié)炎中滑膜方向的細(xì)胞模型”

為了跟前文“關(guān)節(jié)炎中軟骨破壞方向的細(xì)胞模型”相對(duì)應(yīng)，這里標(biāo)題還用了“關(guān)節(jié)炎”這個(gè)描述，但其實(shí)，關(guān)節(jié)炎中涉及滑膜炎癥的主要是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis,RA）。也是關(guān)節(jié)炎中研究最廣泛的類型之一。

在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病進(jìn)展中，至少涉及三大類細(xì)胞，免疫細(xì)胞，骨細(xì)胞，滑膜細(xì)胞。免疫細(xì)胞種類很多，我們暫不討論。骨細(xì)胞，最重要的病理進(jìn)程就是軟骨消失，這個(gè)方向的研究參考前文“關(guān)節(jié)炎中軟骨破壞方向的細(xì)胞模型”�；�膜細(xì)胞，滑膜細(xì)胞在病理進(jìn)程中是如何改變，從而參與到疾病發(fā)生發(fā)展的呢，滑膜增生，分泌炎癥因子。

臨床科研課題設(shè)計(jì)第一步，確定細(xì)胞模型和檢測(cè)指標(biāo)。如果類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎研究中確定了細(xì)胞模型為滑膜細(xì)胞的話，檢測(cè)指標(biāo)有兩個(gè)方向，滑膜增生，增殖方向。分泌炎癥因子，炎癥因子分泌方向。

增殖，是細(xì)胞行為指標(biāo)。炎癥因子分泌，為分子marker指標(biāo)（以分子marker為檢測(cè)指標(biāo)的文章，看“風(fēng)靡里約奧運(yùn)的拔火罐，咱搞個(gè)課題研究吧”中nature medicine的文章）。

今天一共分享4篇文章，涉及兩種滑膜細(xì)胞株，兩種檢測(cè)指標(biāo)方向。

一、Dihydrotestosterone Inhibits Interleukin-1a or Tumor Necrosis Factor a-Induced Proinflammatory Cytokine Production via Androgen Receptor Dependent Inhibition of Nuclear Factor-k B Activation in Rheumatoid Fibroblast-Like Synovial Cell Line. 2011. Biol. Pharm. Bull.

細(xì)胞模型：MH7A。檢測(cè)指標(biāo)：炎癥因子。

研究的結(jié)論是二氫睪酮通過AR受體到NFKB通路抑制滑膜細(xì)胞在IL1a和TNFa刺激下的炎癥因子分泌。

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病女的比男的多，跟紅斑狼瘡這類自身免疫病類似。不過，要是用二氫睪酮來治療的話，額，女變男的變性方案就是這么做的。所以，研究結(jié)果不錯(cuò)，臨床應(yīng)用前景不大。研究藥物的筒子，一定要注意這個(gè)點(diǎn)。

因?yàn)樵陬愶L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病進(jìn)程中IL1a與TNFa發(fā)揮了促炎癥及促軟骨消失的作用（軟骨方向可用這兩個(gè)刺激條件）。所以，這篇文章的刺激條件就用這兩個(gè)。

在MH7A細(xì)胞中，加入IL-1a或TNFa刺激后，再加入DHT作為治療藥物，以IL-8，IL-6，IL-1b這些炎癥因子作為檢測(cè)指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)DHT可以抑制IL-1a或TNFa刺激滑膜細(xì)胞分泌炎癥因子。

PS:這篇文章的圖3圖4圖5，大家可以借鑒下，是把熒光素酶接在相應(yīng)的炎癥因子啟動(dòng)子后面，這種構(gòu)建，其實(shí)是篩選藥物或者新功能基因的方案。

二、Genistein suppresses tumor necrosis factor α-induced inflammation via modulating reactive oxygen species/Akt/nuclear factor κB and adenosine monophosphate-activated protein kinase signal pathways in human synoviocyte MH7A cells. 2014. Drug Design, Development and Therapy

細(xì)胞模型：MH7A。檢測(cè)指標(biāo)：炎癥因子。

刺激條件用的TNFa。前面說DHT上臨床前景不是很好，這篇文章做的是Genistein，大豆來源哦。

在MH7A細(xì)胞中，加入TNFa刺激后，以IL-8，IL-6，IL-1b為檢測(cè)指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)Genistein可以抑制炎癥因子的分泌。

本文其他的內(nèi)容是探討藥物下游的機(jī)制，信號(hào)通路。

三、Inhibitory Effect of Baicalin on Collagen-Induced Arthritis in Rats through the Nuclear Factor–kB Pathway. 2014. J Pharmacol Exp Ther.

細(xì)胞模型：HFLS-RA。檢測(cè)指標(biāo)：炎癥因子。

研究的藥物是baicalin，黃芩苷，從中藥黃芩中提取的一種單體。

HFLS-RA是來源于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的細(xì)胞，本身可作為疾病細(xì)胞，所以，這篇文章沒有加刺激條件，直接在這個(gè)細(xì)胞看藥物的作用。發(fā)現(xiàn)，加入藥物后，炎癥因子TNFa和IL-1b下降，呈濃度梯度依賴。在細(xì)胞上通過炎癥因子為檢測(cè)指標(biāo)，證明藥物的有效性。

四、A methionine aminopeptidase-2 inhibitor, PPI-2458, for the treatment of rheumatoid arthritis. 2004. PNAS.

PNAS的文章。很有借鑒意義。

細(xì)胞模型：HFLS-RA。檢測(cè)指標(biāo)：滑膜細(xì)胞增殖。

研究的藥物是煙曲霉素來源的化合物PPI-2458。

這個(gè)算是IC50測(cè)定。黑色圓圈的是HFLS-RA細(xì)胞，白色圓圈的是HUVEC，藥物都可以抑制其增殖。黑色方塊的是NHDF-Ad皮膚成纖維細(xì)胞，藥物對(duì)其沒有作用。
 

1、在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎研究中，細(xì)胞模型可以用MH7A和HFLS-RA。MH7A可以看作為正常細(xì)胞，疾病細(xì)胞模型需要用外加因子刺激。HFLS-RA本身來源于疾病，為疾病細(xì)胞模型，可以直接用。

2、檢測(cè)指標(biāo)，可以用炎癥因子作為分子marker指標(biāo)。也可以用增殖作為指標(biāo)。

3、增殖作為指標(biāo)，進(jìn)行高通量藥物或者功能基因篩選，是常規(guī)方案。如果以分子marker作為指標(biāo)進(jìn)行高通量藥物或功能基因篩選，可以把該分子的promotor后接GFP或LUC，以GFP或LUC的改變作為檢測(cè)指標(biāo)，參考第一篇文章。

PS：希望和季博在學(xué)習(xí)、實(shí)驗(yàn)上有更多交流的朋友們，可以關(guān)注吉?jiǎng)P基因微信并回復(fù)“季博”兩個(gè)字。

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