AAV-TBG-Cre/GOI在小鼠肝臟特異性基因表達(dá)或敲除中的應(yīng)用與優(yōu)勢(shì)分析

Alb-Cre和Alb-CreERT

TBG-Cre

組織/細(xì)胞特異性

Alb啟動(dòng)子，在肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和前體細(xì)胞中均有轉(zhuǎn)錄活性。

TBG啟動(dòng)子，僅在成熟的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞中有轉(zhuǎn)錄活性。

Alb-Cre，由于發(fā)育中肝前體細(xì)胞中有短時(shí)轉(zhuǎn)錄活性，其中一部分細(xì)胞可分化為膽管上皮細(xì)胞，導(dǎo)致部分膽管上皮細(xì)胞非特異性表現(xiàn)。

TBG-Cre，只在成熟肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)Cre，目前被認(rèn)為是肝細(xì)胞特異性敲除的金標(biāo)準(zhǔn)。

Alb-CreERT，除了在肝前體細(xì)胞內(nèi)的短時(shí)轉(zhuǎn)錄活性外，誘導(dǎo)劑他莫昔芬有一定肝毒性，可引起肝細(xì)胞發(fā)生膽管反應(yīng)，降低肝細(xì)胞特異性。

AAV-TBG-GOI

AAV-TBG-Cre

cKO/KI

操作流程

1. 基因載體構(gòu)建（簡(jiǎn)單）

2. AAV-TBG-GOI病毒制備

3. 尾靜脈注射

4. 開(kāi)展下游實(shí)驗(yàn)研究

1. 通過(guò)常規(guī)基因打靶技術(shù)獲得cKI/KO小鼠

2. AAV-TBG-Cre病毒現(xiàn)貨

3. 尾靜脈注射

4. 開(kāi)展下游實(shí)驗(yàn)研究

1. 基因載體構(gòu)建（復(fù)雜，工作量大）

2. 胚胎干細(xì)胞獲得

3. 同源重組，篩選陽(yáng)性胚胎干細(xì)胞

4. 移植陽(yáng)性胚胎干細(xì)胞至受體胚胎，得嵌合體小鼠

5. 至少經(jīng)過(guò)兩代遺傳獲得純合體小鼠

6. 與Alb-Cre或Alb-CreERT小鼠雜交，得雜合小鼠

7. 篩選鑒定，待小鼠成年，開(kāi)展下游研究

耗時(shí)

1個(gè)月獲得AAV-TBG-GOI病毒，尾靜脈注射后1-2周肝臟特異表達(dá)，即可開(kāi)始下游實(shí)驗(yàn)。

1-2周即可開(kāi)始下游實(shí)驗(yàn)

從Alb-Cre小鼠和cKI/KO小鼠雜交計(jì)算，至少需要2個(gè)月。

條件要求

極低，提供基因名稱(chēng)，即可獲得病毒

低，有cKI/KO小鼠，直接購(gòu)買(mǎi)病毒即可

高，必須同時(shí)有cKI/KO小鼠和Alb-Cre（ERT）小鼠

可控性

基因?qū)�入時(shí)間可控，基因表達(dá)細(xì)胞數(shù)量可通過(guò)病毒滴度控制

基因敲入/敲除時(shí)間可控，基因敲入/敲除細(xì)胞數(shù)量可通過(guò)病毒滴度控制

模型一旦構(gòu)建，基因敲入/敲除立即生效，所有細(xì)胞均一化，無(wú)法控制數(shù)量和比例。

效果

肝細(xì)胞特異性表達(dá)外源基因

肝細(xì)胞特異性敲入/敲除靶基因

在肝臟敲除/敲入靶基因，特異性差（表1）

成本

低

低

高