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本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中人DCR3的含量。
實驗原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人DCR3水平。用純化的人DCR3抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入DCR3,再與HRP標(biāo)記的DCR3抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的DCR3呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人DCR3含量。
試劑盒組成:
試劑盒組成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
說明書 |
1份 |
1份 |
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封板膜 |
2片(48) |
2片(96) |
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密封袋 |
1個 |
1個 |
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酶標(biāo)包被板 |
1×48 |
1×96 |
2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品:135pg/mL |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
1.5ml×1瓶 |
1.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
酶標(biāo)試劑 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
樣品稀釋液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
顯色劑A液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
顯色劑B液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
終止液 |
3ml×1瓶 |
6ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
濃縮洗滌液 |
(20ml×20倍)×1瓶 |
(20ml×30倍)×1瓶 |
2-8℃保存 |
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
注意事項:
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
計算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。
2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%
檢測范圍:
5.0pg/mL -100pg/mL
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月