光化學法誘導腦缺血（MCAO）模型的建立

背景：缺血性腦血管病嚴重危害人類的健康，建立一種與人腦梗塞類似的動物模型使之適合溶栓治療研究具有重要的研究意義和實用價值。目前被廣泛應用的“阻斷大腦中動脈制備局部腦梗塞動物模型”方法，由于其存在側(cè)支循環(huán)，受累的腦組織缺血程度常不一致，梗塞灶的大小和位置也有差異，加之大腦中動脈阻斷需要一定的手術(shù)技巧，故其應用受到定的限制。加之大腦中動脈阻斷需要一定的手術(shù)技巧，故其應用受到一定的限制。靜脈注射微血栓栓塞腦內(nèi)小動脈造成的腦梗塞，受血栓大小的影響，而且栓塞部位不易控制，也有其應用局限性。

 

自1984年Dietrich和Watson等首先報道，采用光化學法誘導腦梗死動物模型以來，建立該模型的方法逐漸得到發(fā)展、完善和成熟，現(xiàn)已成為一種重要的腦梗死動物型，并廣泛用于腦梗死的神經(jīng)生化、生理、病理，以及防治等方面的研究。這里我描述一種實驗報告采用光化學法誘導腦梗塞模型的建立。

 

1.1  動物：成年大鼠，250g

1.2  試劑：

玫瑰紅(Sigma Aldrich, Steinheim, D)                   

4%多聚甲醛(Merck KGaA, Darmstadt, D)

1.3  設備和耗材：

1.3.1  小動物麻醉、腦立體定位（生產(chǎn)廠家：瑞沃德公司）

 

 

1.3.2  顯微外科手術(shù)器械包（型號：SP0003-R，生產(chǎn)廠家：瑞沃德公司）

 

 

1.3.3  561mm黃綠光激光器（型號：R-LG561-100-A5，生產(chǎn)廠家：瑞沃德公司）：用于對動物頭部進行光刺激造模。

 

 

1.3.4  小動物保溫箱（型號：912-001，生產(chǎn)廠家：LYON/USA），供動物手術(shù)后護理。

 

 

1.3.5  SMART3.0小動物行為視頻追蹤系統(tǒng)（生產(chǎn)廠家：Panlab/Spanish），供造模后通過動物行為評判神經(jīng)功能。

 

 

1.3.6  腦模具（生產(chǎn)廠家：瑞沃德公司），供腦切片染色。

 

 

1.3.7  其他輔助設備和耗材（生產(chǎn)廠家：瑞沃德公司）

  

 

 

STEP1：

動物麻醉和頭部固定：動物經(jīng)麻醉機誘導進入麻醉，移到定位儀裝置進行頭部固定和麻醉維持，穩(wěn)定一會后，使用鑷子夾足，測試麻醉的深度，當呼吸平緩，無壓足縮回反應時，說明進入實驗麻醉中期。另外開啟體溫維持儀進行實驗期動物體溫的維持（如圖1）。

 

圖1

STEP2：

左股靜脈暴露和空心與孟加拉玫瑰聚乙烯導管輸液，導管用線進行固定（如圖2）。

 

圖2

 

STEP3：

縱向切開頭皮（2.0-2.5 厘米）以暴露頭骨。為了避免傷口并發(fā)癥，頭骨暴露應進行單一的切割。輕輕刮開顱骨表面的一層膜，使冠狀面和矢量中線、前囟點清晰可見，暴露顱骨表面（如圖3）。

 

STEP4：

波長為561nm直徑為8mm的激光束立體定向定位在顱骨AP:0.5mm、ML:3.5mm表面。顱骨被照射20分鐘。在照射前2分鐘，經(jīng)預留導管緩慢注入玫瑰紅（0.133 毫升/千克體重，10 毫克/毫升生理鹽水）到靜脈。注射完后，拔出導管，進行進行皮膚的縫合（如圖4）。

 

 

圖3                                   圖4

 

STEP5：

術(shù)后，把大鼠放回到籠子，在保溫箱中12h光明和黑暗周期和食物和水自由采食的護理。

 

STEP6：

對照組動物接受相同的實驗操作，包括玫瑰靜脈注射，但沒有激光對顱骨表面進行照明。

 

3.1 神經(jīng)功能評分系統(tǒng)測試

 

行為學進行水迷宮實驗

 

 

圓筒試驗分析

 

3.2 生理組織觀察

 

      組織學染色腦切片                 非侵入性磁共振成像掃                

 

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