國(guó)自然之三——臨床疾病基礎(chǔ)研究課題設(shè)計(jì)：細(xì)胞模型及檢測(cè)指標(biāo)

上回我們說(shuō)到，臨床基礎(chǔ)研究課題，創(chuàng)新點(diǎn)在基因時(shí)研究?jī)?nèi)容該如何設(shè)計(jì)。三大塊，臨床相關(guān)性（A-C），功能（A-D），機(jī)制（A-B）。從而驗(yàn)證我們的假設(shè)“A基因通過(guò)調(diào)控B機(jī)制在C疾病中發(fā)揮D功能”。

遺留了一個(gè)問(wèn)題，細(xì)胞模型（動(dòng)物模型）和檢測(cè)指標(biāo)如何選擇。機(jī)制的嚴(yán)謹(jǐn)性（深度）和熱度（機(jī)制細(xì)分方向）是課題研究水平的地方，上回都沒有說(shuō)要單獨(dú)出來(lái)聊聊。獨(dú)獨(dú)把細(xì)胞模型和檢測(cè)指標(biāo)拿出來(lái)了，為啥呢。因?yàn)檫@個(gè)是評(píng)估課題科學(xué)性的地方。

疾病研究歷史中，按照現(xiàn)在科學(xué)研究的要求，越細(xì)越好，一旦疾病臨床表現(xiàn)確定到是哪個(gè)器官組織出問(wèn)題，我們就往器官組織里面去找原因了。器官組織的最小功能單位是細(xì)胞。那么就問(wèn)，是什么細(xì)胞與正常細(xì)胞不一樣，從而導(dǎo)致器官組織有問(wèn)題，最終出現(xiàn)臨床表現(xiàn)的。這里的不一樣就是病理改變，醫(yī)院里病理科和檢驗(yàn)科天天做。（想把寶圖拿出來(lái)，擔(dān)心大家審美疲勞，就不拿了。不清楚的筒子，移步前文參考。）

在細(xì)胞層面，我們要考慮3個(gè)問(wèn)題，1、誰(shuí)。2、怎么與正常不同（病理改變-檢測(cè)指標(biāo)）。3、我能做嗎（可行性）。前面兩個(gè)是科學(xué)性評(píng)估，后一個(gè)跟我們一輩子的科學(xué)生涯相關(guān)。

1、誰(shuí)

挖一塊疾病組織，問(wèn)，這里面是只有一類細(xì)胞，還是多類細(xì)胞呀。大家不要認(rèn)為這個(gè)問(wèn)題很幼稚。N多年前，不少科學(xué)家默認(rèn)腫瘤是均一組織，現(xiàn)在大家知道了，腫瘤是異質(zhì)性的。

我想，如果您能從第一篇國(guó)自然文章看到這一篇，那您的答案肯定是多類。那么再問(wèn)一個(gè)問(wèn)題，我的課題設(shè)計(jì)中是寫多類還是一類呢。

如果您的答案是寫多類，那么返回意見往往是，課題設(shè)計(jì)不聚集。因?yàn)槲覀冊(cè)诩?xì)胞上的實(shí)驗(yàn)，是為了驗(yàn)證我們研究的A基因或藥物，是否能夠在細(xì)胞上導(dǎo)致病理改變，或起到緩解病理改變的作用。同一個(gè)基因，在不同的細(xì)胞類型中，功能可能是不同的，機(jī)理也可能是不同的。現(xiàn)在的課題看的是深度，而不是廣度�，F(xiàn)在的研究，一般都是聚集于一點(diǎn)，深挖。越深越好。

不知道是否有筒子反對(duì)這個(gè)觀點(diǎn)。因?yàn)椋�現(xiàn)在腫瘤治療領(lǐng)域，CART很熱門，CART研究如果您還是涉及一類細(xì)胞，就錯(cuò)了。為啥呢。因?yàn)檫@類研究是研究免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，研究的是兩類細(xì)胞間的關(guān)系（免疫細(xì)胞其實(shí)不是一類細(xì)胞，做免疫細(xì)胞的必須明確是哪類免疫細(xì)胞）。研究細(xì)胞間關(guān)系的課題，關(guān)系涉及的細(xì)胞類型，都要設(shè)計(jì)進(jìn)來(lái)。

前幾年，不少人栽跟頭的地方是，應(yīng)該只放一類細(xì)胞，放了多類。這幾年，研究關(guān)系的課題多了，不少人設(shè)計(jì)中卻只放了一類細(xì)胞的設(shè)計(jì)。

大家設(shè)計(jì)課題時(shí)，問(wèn)問(wèn)自己，我研究的是A基因或藥物在一類細(xì)胞中的功能，還是細(xì)胞間關(guān)系中發(fā)揮功能。細(xì)胞模型是誰(shuí)。

2、怎么與正常不同（病理改變-檢測(cè)指標(biāo)）

這個(gè)地方其實(shí)就是我們實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)指標(biāo)了。我采用什么指標(biāo)證明我研究的基因或藥物在病理細(xì)胞中發(fā)揮了與疾病相關(guān)的功能。

比如我做癲癇研究，癲癇的發(fā)病器官和組織是腦部腦組織。細(xì)胞是腦神經(jīng)元。OK，我的設(shè)計(jì)是，“把我假設(shè)與癲癇相關(guān)的基因，在腦神經(jīng)元中干擾或過(guò)表達(dá)后，檢測(cè)MTT生長(zhǎng)曲線，流式檢測(cè)周期改變，流式檢測(cè)凋亡改變”。這個(gè)設(shè)計(jì)OK嗎，我們平時(shí)看文章，很多文章里面都在這么做。評(píng)估所設(shè)計(jì)的檢測(cè)指標(biāo)是否OK，科學(xué)性評(píng)估的依據(jù)是，這些檢測(cè)指標(biāo)是否為臨床上這類細(xì)胞的病理改變。也就是臨床病人的這類細(xì)胞是否發(fā)生這個(gè)改變。癲癇，病人的腦神經(jīng)元與正常人腦神經(jīng)元的不同之一是異常放電。異常放電，在細(xì)胞上，我們應(yīng)該做的是電生理檢測(cè)。

這個(gè)點(diǎn)上，“實(shí)驗(yàn)方法不合理”這類返回意見就是在說(shuō)這個(gè)�！皩�(shí)驗(yàn)方法缺乏新意”很多老師看到這個(gè)返回意見，認(rèn)為是要設(shè)計(jì)點(diǎn)新的實(shí)驗(yàn)。其實(shí)這個(gè)點(diǎn)是在說(shuō)，您用的實(shí)驗(yàn)，是現(xiàn)在大家都在做的嗎。用已經(jīng)過(guò)時(shí)的方法也可以，但現(xiàn)在大家常用的方法您必須得有。

細(xì)胞模型和檢測(cè)指標(biāo)，這個(gè)地方到底怎么評(píng)估，我們下回分解。

3、我能做嗎（可行性）

季博說(shuō)，這個(gè)點(diǎn)跟我們一輩子的科研生涯相關(guān)。這不是嚇唬您�？蒲猩�涯中，拿課題經(jīng)費(fèi)很重要，但更重要的是，我把課題做出來(lái)了，發(fā)表了高分SCI文章，讓大家都認(rèn)可我的科研能力，然后順利的拿到下一個(gè)課題，有經(jīng)費(fèi)了繼續(xù)研究。良性循環(huán)。

如果課題設(shè)計(jì)中，細(xì)胞很難操作，實(shí)驗(yàn)很難養(yǎng)。一審專家都會(huì)去看申請(qǐng)人背景介紹，看發(fā)表過(guò)啥文章。如果發(fā)表的文章用過(guò)這個(gè)細(xì)胞，做過(guò)這些實(shí)驗(yàn)。那么您完成本項(xiàng)目是有可行性的。（現(xiàn)在說(shuō)，申請(qǐng)國(guó)自然必須要有好的SCI文章，這些文章其實(shí)就是來(lái)證明申請(qǐng)人有科研能力，能夠完成本項(xiàng)目研究。）

國(guó)自然標(biāo)書模板中，必須介紹申請(qǐng)人曾經(jīng)承擔(dān)過(guò)什么項(xiàng)目，結(jié)題什么情況。如果我拿到了，但細(xì)胞難搞，實(shí)驗(yàn)難做，沒發(fā)什么好文章。哪，憑什么說(shuō)服專家，現(xiàn)在申請(qǐng)的這個(gè)項(xiàng)目我會(huì)好好做，會(huì)出好成果呢。

一旦拿不到下一個(gè)課題經(jīng)費(fèi)，后續(xù)科研怎么做呢。除非您認(rèn)識(shí)扎克伯格，不差錢。不過(guò)，可行性有問(wèn)題的項(xiàng)目，哪怕再美好，估計(jì)他也不會(huì)投經(jīng)費(fèi)吧。

總結(jié)下，臨床疾病基礎(chǔ)研究課題設(shè)計(jì)第一步

1、確定臨床問(wèn)題研究的細(xì)胞模型（動(dòng)物模型）。

2、確定評(píng)估基因或藥物功能的檢測(cè)指標(biāo)。

3、評(píng)估課題組可行性。

PS：希望和季博在學(xué)習(xí)、實(shí)驗(yàn)上有更多交流的朋友們，可以關(guān)注吉?jiǎng)P基因微信并回復(fù)“季博”兩個(gè)字。

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