怎么選擇適合的GAPDH內(nèi)參抗體?

在Western Bloting實驗中，在遇到總蛋白濃度測定不準(zhǔn)確時候，或者蛋白質(zhì)樣品在電泳前上樣時產(chǎn)生的樣品間的操作存在誤差；這些誤差可以通過測定每個樣品中實際轉(zhuǎn)到膜上的內(nèi)參,比如內(nèi)參GAPDH的含量來進行校正。

GAPDH（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）是參與糖酵解的一種關(guān)鍵酶，由4個30-40kDa的亞基組成，分子量146kDa，檢測條帶大約在36kDa。 GAPDH基因幾乎在所有組織中都高水表達，廣泛用作Western blot蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參。

如何選擇合適的GAPDH抗體？

內(nèi)參抗體雖然選擇較多，但是也需要遵循一定的原則，并契合實際的應(yīng)用要求。首先，我們需要考慮目的蛋白的大小，我們推薦內(nèi)參要與檢測的目的蛋白的分 子量最好相差5KD以上，因此你需要根據(jù)你目的檢測蛋白的分子量來選擇合適的內(nèi)參，由于GAPDH的檢測分子量大約在36kD，因此該內(nèi)參抗體不是很適合用于檢測30kD-40kD大小目標(biāo)蛋白的WB實驗中。另外，不同的組織來源的樣本在選擇內(nèi)參時還有一定的區(qū)別。比如某些細(xì)胞中，由于組織缺氧、糖尿病等因素會導(dǎo)致GAPDH的表達增高，不適合做內(nèi)參。

因為檢測的目的蛋白分子量在50kD左右，之前的β-Tubulin不是很適合，就購買了一支Abbkine的GAPDH抗體做內(nèi)參，效價確實有點驚訝，我用1:1000倍起始稀釋覺得條帶很濃，后來一直到1:8000稀釋，同時減少了曝光時間，條帶仍然很清晰�！�—武漢大學(xué)生命科學(xué)院一客戶

另外，我們還需要考慮自己的需要，特別是實驗應(yīng)用上的需要。一般來說，應(yīng)用類型越多，在使用過程中的選擇余地就越大，而小鼠源的單克隆抗體一般在特異性、穩(wěn)定性以及效價都要優(yōu)于多克隆抗體。 另外，抗體的效價也是考察該抗體性價比的重要方面，也即相當(dāng)于實際應(yīng)用時的稀釋比率。一個效價高的100μl GAPDH抗體（假如其WB檢測的稀釋比率是1:5000，最終使用液相當(dāng)于500ml），要比效價低的1ml的GAPDH抗體（假如 WB檢測的稀釋比率是 1:200，最終使用液相當(dāng)于2ml）性價比更高。因此在選擇抗體的時候，不但需要考慮抗體的量，還需要考慮抗體的效價，即不同應(yīng)用的建議稀釋比率。

為什么選擇推薦Abbkine品牌的GAPDH抗體？

供應(yīng)GAPDH抗體的進口品牌有很多，像Abcam、Santa Cruz、Cell Signaling（CST）、Millipore等都有相關(guān)GAPDH抗體提供。但是由于不是專門的標(biāo)簽和內(nèi)參抗體供應(yīng)商，因此在性價比上不是最優(yōu)的選擇， 以Abcam為例，其一支100μl GAPDH抗體的RMB報價為￥4418；CST的一支100μl GAPDH抗體的報價是￥2997。

另外，一些國內(nèi)的供貨商也能提供分裝的GAPDH抗體，但是在品牌和質(zhì)量保障上都有不足。國產(chǎn)分裝的GAPDH體在質(zhì)量穩(wěn)定性上有不足，并且經(jīng)過分裝以后，其效價也有損失。而原產(chǎn)于國內(nèi)實驗室的GAPDH抗體有些具有較好的檢測活性，但是在應(yīng)用類型上有差距，并且在批次之間的穩(wěn)定性上較難控制，而國內(nèi)僅有的少量原產(chǎn)抗體也是多克隆抗體。如果您想買到一支性價比更高，同時也是原裝進口品牌的GAPDH內(nèi)參抗體，那 Abbkine可能會是您的一個重要考慮選項之一。我們向您推薦Abbkine的GAPHD單克隆內(nèi)參抗體Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (2B5)（貨 號A01020）。

該抗體單克隆抗體，克隆號為2B5。其抗原為KLH偶聯(lián)的GAPDH部分多肽序列，其檢測種屬非常的廣泛，可識別人、小鼠、兔、大鼠、猴、狗、雞、豬和綿羊等其它哺乳動物的GAPDH蛋白，也算是一個真正保守的內(nèi)參抗體。另外，該抗體的效價非常高，WB實驗推薦稀釋比率為 1:1000-1:10000，甚至有客戶報告更高的稀釋比率。

該β-Tubulin內(nèi)參抗體免疫熒光的效果也非常棒，是一款非常適合做免疫熒光對細(xì)胞骨架進行染色定位的抗體產(chǎn)品。另外，也有客戶報告使用該抗體用于組織染色，也取得了意外的效果。

Abbkine還提供大包裝1ml的GAPDH內(nèi)參抗體，非常適合經(jīng)常進行內(nèi)參驗證或校準(zhǔn)，或者進行細(xì)胞骨架熒 光定位的免疫學(xué)實驗需求。為方便客戶 的使用， 上述產(chǎn)品，Abbkine均在中國備有現(xiàn)貨。Abbkine針對中國市場，提供全球化的產(chǎn)品質(zhì)量追蹤和售后服務(wù)以及保障，如果您在使用過程中有任何問題， 請直接與其當(dāng)?shù)卮�理商艾美捷科技有限公司�?lián)系。

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