2015 版《中國藥典》農(nóng)殘檢測的解決方案以及方法包介紹
2015 版《中國藥典》農(nóng)殘檢測的解決方案以及方法包介紹
賽默飛世爾科技三重四極桿串接氣質(zhì)
目 錄
一. 方法包簡介
二. 儀器簡介
三. 化合物簡介
四. 相關(guān)政策及法規(guī)
五. 儀器和設(shè)備
六. 樣品前處理方法
七. 方法包使用簡介
八. 應(yīng)用文章
一．方法包簡介
方法包是賽默飛世爾科技色譜質(zhì)譜部應(yīng)用部門針對客戶需求提出的簡易儀器使用流程，方法包內(nèi)所涉及的化合物均為常見的能在 GC/MS 上檢測的化合物，如農(nóng)藥殘留、多環(huán)芳烴、多氯聯(lián)苯、多溴聯(lián)苯和多溴聯(lián)苯醚、鄰苯二甲酸酯等。方法包的作用就是能使客戶更快更簡便得使用儀器，盡快上手。
方法包包括進(jìn)樣方法、數(shù)據(jù)處理方法（TraceFinder 方法文件夾）、相關(guān)應(yīng)用文章、相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、色譜柱信息、前處理方法、數(shù)據(jù)文件等，客戶可以直接調(diào)用進(jìn)樣方法和數(shù)據(jù)處理方法完成化合物的定性定量分析。
由于 Thermo ScientificTM TSQ 8000 Evo 采用 T-SRM 進(jìn)樣方法而不是分時間段的掃描方法，原來的進(jìn)樣的方法可以直接調(diào)用，即使保留時間會有微小的偏差，也不會影響最終的結(jié)果。另外，TraceFinder 軟件自帶的數(shù)據(jù)庫可以直接編輯數(shù)據(jù)處理方法，數(shù)據(jù)庫里包括化合物的名稱、離子對、碰撞能量、定量離子、定性離子、CAS 號等信息。同時，TraceFinder 軟件可以根據(jù)數(shù)據(jù)處理方法自動關(guān)聯(lián)生成 TSQ 8000 Evo 的方法文件。這樣應(yīng)用 TraceFinder 就可以直接生成數(shù)據(jù)處理方法和進(jìn)樣方法。整個過程都是自動化的，幾乎不需要操作者手動輸入任何操作信息。
方法包（Method Kit）
對于常用分析化合物，我們可以提供方法包。
包括：鄰苯二甲酸酯、PCB、PAH、PBDE、農(nóng)殘篩查、GB2763、藥典中農(nóng)殘
檢測、煙草中農(nóng)殘、PM2.5、香港規(guī)管方案、亞硝胺、二惡英等。
目的：上手方便，直接使用。
二．儀器簡介
TSQ 8000 Evo 三重四極桿串接氣質(zhì)聯(lián)用儀
秉承著在氣相色譜三重四極桿質(zhì)譜中技術(shù)的一貫領(lǐng)先優(yōu)勢，Thermo Fisher Scientific 在推出 TSQ 8000 之后再次創(chuàng)新，推出了更新的一款氣相串接質(zhì)譜儀 TSQ 8000 Evo，該款高效的 GC/MS/MS 提供了永不停機(jī)的生產(chǎn)率，其出色的靈敏度，超快的掃描速度，簡便的 MSMS 功能，滿足最苛刻的定量定性分析要求，為食品安全、環(huán)境分析、法醫(yī)和制藥應(yīng)用分析提供基礎(chǔ)。
TSQ 8000 Evo 主要特點：
• AutoSRM 功能自動優(yōu)化二級離子對信息；
• 定時保留時間 SRM 功能（T-SRM）和定時保留時間 SIM 功能（T-SIM）使高通量檢測成為可能，并且優(yōu)化方法設(shè)置參數(shù)，無需分配時間段；
• 最新的 TraceFinder 軟件，提供最新的技術(shù)平臺，界面友好的色譜分析軟件，可以直接調(diào)用數(shù)據(jù)庫信息自動建立數(shù)據(jù)處理方法及進(jìn)樣方法；
• 高達(dá) 800 MRM/s 的掃描速度，即使在極限高速掃描條件下仍不會過多損失靈敏度
• 在質(zhì)譜不泄真空的情況下，更換整個離子源，節(jié)省常規(guī)系統(tǒng)維護(hù)時間，簡化操作；
• 雙燈絲設(shè)計，并且燈絲在同一側(cè)；
• 離子源上具有雙加熱區(qū)，有效去除基質(zhì)對離子源的污染，節(jié)省維護(hù)時間；
• 彎曲的預(yù)四極桿，有效去除中性噪音，減少背景并提高靈敏度。
• 方法橋，可以讀取 Thermo ScientificTM ISQ 單四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀的方法或者其他公司的 SRM 方法。
三．化合物簡介
新藥典共需要檢測 76 種農(nóng)藥（包含 2 種內(nèi)標(biāo)化合物）
表 1. 藥典GCMSMS 方法檢測的 76 種化合物列表（* 為內(nèi)標(biāo)）
四．相關(guān)法規(guī)及政策
2014 年 3 月，國家藥典委員會官網(wǎng)發(fā)布關(guān)于《中國藥典》2015 年版通則（草案）公開征求意見的通知，并指明國家藥典委組織相關(guān)專業(yè)委員會已完成了通則（附錄）編制及編碼的研究工作。2015 年，國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布關(guān)于《中華人民共和國藥典》（2015 年版）的公告，新版藥典將于 2015 年 12 月 1 日起正式實施。
2015 年版本《中國藥典》收載藥品數(shù)量達(dá)到 5608 個，比 2010 年的藥典增加了 20%，不但藥品質(zhì)量檢測與控制方法及中藥、化學(xué)藥和生物藥標(biāo)準(zhǔn)將得到廣泛性修訂、完善及提升，而且在中藥標(biāo)準(zhǔn)方面，基本建立了適合中藥特色與特性的整體控制質(zhì)量的新體系和新模式。新版藥典更加注重體現(xiàn)中藥特色，表達(dá)中藥特點，并致力于中藥質(zhì)量整體控制水平的進(jìn)一步提高，籌建中國藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)譜圖庫，引領(lǐng)中藥標(biāo)準(zhǔn)國際化進(jìn)程�！吨袊幍洹�2015 年版通則增訂了中藥材農(nóng)藥殘留量測定法，其中包括用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定 74 種農(nóng)殘，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定 153 種農(nóng)殘，為中藥材農(nóng)殘測定確定了分析方法，具有更好的特異性和靈敏性。
五．儀器和設(shè)備
儀器：Thermo ScientificTM TSQ 8000 Evo 氣相色譜三重四極桿串接質(zhì)譜儀。
設(shè)備：渦旋混合器、離心機(jī)、氮吹儀、水浴鍋等。
色譜柱：TR-Pesticide II（30 m*0.25 mm*0.25 μm, 帶毛細(xì)管色譜柱 5 m 預(yù)柱）毛細(xì)管色譜柱（Thermo Fisher Scientific）。
六．樣品前處理
按照 2015 版《中國藥典》的方法進(jìn)行前處理：
1. 提取
藥材或飲片，粉碎后（過三號篩）取 3 g，置 50 mL 聚苯乙烯具塞離心管中；
加入 15 mL 1 % 冰乙酸，渦旋放置 30 min；
加入 15 mL 乙腈與 0.1 mL 內(nèi)標(biāo)，渦旋混勻，置振蕩器上劇烈震蕩（500 次/min）5 min；
加入無水硫酸鎂和無水乙酸鈉的混合粉末（4:1）7.5 g，立即搖散，震蕩 3 min；
冰浴 10 min，離心（4000 轉(zhuǎn)/min）5 min。
2. 凈化
取上清液 9 mL，放入分散固相萃取柱*中，渦旋混合，震蕩 5 min；
4000 轉(zhuǎn)/min 離心 5 min，取上清液 5mL；
氮吹水浴濃縮至 0.4 mL，加入乙腈至 1 mL；
用微孔濾膜（0.22 μm）濾過，取濾液分析。
* 無水硫酸鎂 900 mg，N- 丙基乙二胺（PSA）300 mg，十八烷基硅烷鍵合硅膠 300 mg，石墨化炭黑 90 mg，硅膠 300 mg
七．方法包的使用
1. 進(jìn)樣方法使用：直接使用方法包中meth 結(jié)尾的文件
，進(jìn)行進(jìn)樣分析。
，進(jìn)行進(jìn)樣分析。不同儀器配置可能稍有不同，可以參考以下方法截圖。
2. 數(shù)據(jù)處理方法建立：直接拷貝方法包中的文件夾
到 C:\TraceFinderData\32\
到 C:\TraceFinderData\32\Methods 中，方法就可以直接在 TraceFinder 軟件中打開，這個方法包括數(shù)據(jù)處理方法和進(jìn)樣方法。
3. 將步驟 1 中的進(jìn)樣方法拷貝粘貼到 C:\TraceFinderData\InstrumentMethods 中，在 Instrument Methods中選擇這個文件，然后保存這個 TraceFinder 的 Master Method。
4. 將按照步驟 1 進(jìn)樣完成的數(shù)據(jù)文件與 TraceFinder 方法相關(guān)聯(lián)，得到完整的數(shù)據(jù)處理方法。按需要更改保留時間等參數(shù)進(jìn)一步對數(shù)據(jù)處理方法進(jìn)行優(yōu)化，得到準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)處理方法。整個過程無需輸入化合物信息，離子對信息，挑選離子對信息找到化合物，所有的步驟均是自動完成，一點即可，極大得提高分析效率，簡化方法流程。
最終只需要再輸入定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線各濃度點和具體濃度即可完成數(shù)據(jù)處理方法的建立。
八．應(yīng)用文章
氣相色譜串接質(zhì)譜聯(lián)用法用于藥材中多農(nóng)殘測定
鄧武劍 朱曼潔
賽默飛世爾科技（中國）有限公司
關(guān)鍵詞
藥材；農(nóng)藥殘留；TSQ 8000 Evo 三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用
摘要
為了應(yīng)對 《中國藥典》2015版的實施，根據(jù)《中國藥典》2015版2341款第四法的要求，本文建立了一種運用三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀（GC-MS/MS）來檢測藥材、飲片及制劑中部分農(nóng)藥殘留量的分析方法。試樣加無水硫酸鎂、無水乙酸鈉后，用乙腈提取，提取液經(jīng)凈化后，氮吹儀濃縮，用乙腈定容。在毛細(xì)管氣相色譜柱上分離，采用 GC-MS/MS 測定，用外標(biāo)法定量計算。各化合物按照濃度5.0、10.0、25.0、50.0、100.0 μg/L 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，74 種農(nóng)藥組分在5.0~100.0 μg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)均大于0.99。按照 IUPAC（國際理論（化學(xué)）與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會）方法規(guī)定計算各組分檢出限，各組分檢出限在0.01–2.15 μg/L 之間。結(jié)果表明，應(yīng)用賽默飛世爾科技TSQ8000 Evo 完全可以應(yīng)對2015版《中國藥典》關(guān)于 GC-MS/MS檢測藥材、飲片及制劑中部分農(nóng)藥殘留量的要求。
前言
隨著對藥材農(nóng)藥殘留的報道日益增多，人們對農(nóng)藥殘留危害的認(rèn)識也越來越深入，藥典對其制定檢測方法也越來越全面，越來越科學(xué)�！吨袊幍洹�2000 年版首次規(guī)定了 9 種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的檢測方法，之后在 2005 年版的藥典中，除甘草、黃芪等藥材外，對其余藥材均未提出限量要求。2010版 《中國藥典》 中不僅規(guī)定了 9 種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的檢測方法，而且規(guī)定了 12 種有機(jī)磷類的檢測方法，還規(guī)定了 3 種擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留量的檢測方法，然而在限量標(biāo)準(zhǔn)方面僅規(guī)定了甘草和黃芪兩種藥物的六六六、滴滴涕、五氯硝基苯的限量標(biāo)準(zhǔn)，其它中藥材尚未涉及。最新的 2015 版 《中國藥典》 對農(nóng)殘檢測進(jìn)一步作出了詳細(xì)規(guī)定，并首次規(guī)定了用 GC-MS/MS 和LC-MS/MS 等技術(shù)用于藥材中農(nóng)殘檢測。歷版 《中國藥典》對藥材農(nóng)藥殘留量部分主要變化如表 1 所示：
表 1. 歷版 《中國藥典》 對藥材農(nóng)藥殘留量部分主要變化
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出版年份 |
限定與變化 |
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2000 |
提出了 9 種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的檢測方法 |
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2005 |
沒變化 |
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2010 |
9 種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的檢測方法
12 種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測方法
3 種擬除蟲菊酯的檢測方法 |
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2015 |
第一法有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測定法-色譜法
第二法有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留量測定法-色譜法
第三法擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留量測定法-色譜法
第四法農(nóng)藥多殘留量測定法-質(zhì)譜法 |
1.實驗部分
1.1 儀器和試劑
質(zhì)譜儀器：TSQ 8000 Evo 質(zhì)譜儀（賽默飛世爾科技，美國）；
氣相色譜儀：Trace1310 GC 配 AI l310 自動進(jìn)樣器（賽默飛世爾科技，美國）；
色譜柱：TR-Pesticide II 30 m*0.25 mm*0.25 μm 毛細(xì)管色譜柱（賽默飛世爾科技，美國）；
試劑：甲苯、丙酮、乙腈，均為色譜純；
1.2 儀器方法
氣相方法：
柱溫箱：60 ºC 保持 1 min，以 30 ºC/min 升至 180 ºC，再以10 ºC/min 升至 300 ºC，保持 5 min。
進(jìn)樣口：不分流進(jìn)樣，不分流時間：1.5 min；
進(jìn)樣口溫度：270 ºC；載氣：恒流，1.2 mL/min；
傳輸線：280 ºC
質(zhì)譜方法：離子源溫度為 300 ºC，采用 T-SRM 方法，具體檢測離子對如表 2 所示：
表 2. 76 種農(nóng)藥對照品、監(jiān)測離子對、碰撞電壓（CE）
注：化合物 10 和 30 為內(nèi)標(biāo)，其余 74 項為目標(biāo)化合物
1.3 樣品前處理
1）樣品提�。喝」┰嚇悠罚ㄋ幉幕蝻嬈┓鬯槌煞勰�，稱取3 g 樣品到 50 mL 離心管中，加入 5 mL 1% 乙酸溶液，渦旋使樣品充分浸潤、靜置。再加入10 mL乙腈震蕩混勻，加入 4 g MgSO4、1 g CH3COONa，在渦旋振蕩器上振蕩2 min，冰浴中放置冷卻 5 min，然后在 5000 rpm 轉(zhuǎn)速下離心 5 min。
2）樣品凈化：取上清液 8 mL，轉(zhuǎn)移到 15 mL 凈化管，凈化管中包括 900 mg MgSO4、300 mg PSA、300 mg C18、石墨化炭黑 90 mg。旋渦震蕩樣品 1 min，然后在 5000 rpm轉(zhuǎn)速下離心 5 min。準(zhǔn)確取上清液 5 mL，N2 吹儀上于 40 ℃水浴吹干，乙腈定容至 1 mL，直接 GC-MS/MS 分析。
1.4 樣品基質(zhì)溶液
按照 1.3 的程序處理藥材樣品，得到空白樣品的基質(zhì)溶液。
1.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置
1）標(biāo)準(zhǔn)儲備液：在十萬分之一分析天平上稱取每種農(nóng)藥單標(biāo)化合物 10 mg，加入 10 mL 相應(yīng)的溶劑（根據(jù)不同的化合物加入丙酮、甲苯或者乙腈）溶解，配制成濃度為約 1000 mg/L的溶液。每種單個標(biāo)準(zhǔn)儲備液的濃度根據(jù)稱樣量和加入溶劑的體積計算得到。所有單標(biāo)儲備液在 -20℃ 冰箱中冷凍保存。單標(biāo)儲備液的有效期為 6 個月。
2）混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：移取適量的單標(biāo)儲備液，用乙腈稀釋。中間標(biāo)準(zhǔn)儲備液的濃度為10.0 mg/mL。中間標(biāo)準(zhǔn)儲備液在-20 ℃ 冰箱中冷凍保存。中間儲備液的有效期為 3 個月。
3）工作標(biāo)準(zhǔn)溶液：取適量的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，以空白樣品基質(zhì)液（1.4）依次稀釋成濃度為 5.0、10.0、25.0、50.0、100.0工作標(biāo)準(zhǔn)溶液。
2.2. 實驗結(jié)果分析
2.1 色譜分離結(jié)果
每個化合物 SRM 質(zhì)譜條件（母離子-子離子-碰撞能量）從TraceFinder 的 CDB 中導(dǎo)出（見表 2），在該條件下運行樣品可得到目標(biāo)物的 SRM 總離子流圖見圖 1。
圖1
2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性、檢出限及精密度
配置混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，各濃度分別為：5.0、10.0、25.0、50.0、100.0 μg/L 采用上述方法分別進(jìn)樣分析，考察各組分的線性。實驗結(jié)果表明 74 種農(nóng)藥組分在 5.0~100.0 μg/L 線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)均大于 0.99, 對同一樣品連續(xù)進(jìn)樣 6 針，RSD 在0.37%–4.91%之間，重復(fù)性良好。按照IUPAC 方法規(guī)定計算各組分檢出限，各組分檢出限在 0.01–2.15 μg/L 之間，根據(jù)本應(yīng)用方法的前處理，其檢出限都滿足最新藥典對于農(nóng)殘分析檢出限的要求（見表 3）。
表 3. 藥材中 74 種農(nóng)殘的線性方程及檢出限
3.結(jié)論
本文參考藥典前處理方法，建立了氣相串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS）測定藥材中的 74 項農(nóng)殘，樣品前處理只需要 45 min 即可完成，經(jīng)快速前處理后，在 TSQ 8000 Evo 三重四極桿儀器上，通過一針分析，在 25 min 內(nèi)完成分離和檢測。以快速的前處理結(jié)合賽默飛的 TSQ 8000 Evo 高通量、高靈敏度的三重四極桿儀器，為藥材的農(nóng)殘分析帶來高效、準(zhǔn)確、方便易用的解決方案。
關(guān)于賽默飛世爾科技
賽默飛世爾科技（紐約證交所代碼：TMO）是科學(xué)服務(wù)領(lǐng)域的世界領(lǐng)導(dǎo)者。公司年銷售額170 億美元，在50 個國家擁有約50,000 名員工。我們的使命是幫助客戶使世界更健康、更清潔、更安全。我們的產(chǎn)品和服務(wù)幫助客戶加速生命科學(xué)領(lǐng)域的研究、解決在分析領(lǐng)域所遇到的復(fù)雜問題與挑戰(zhàn)，促進(jìn)醫(yī)療診斷發(fā)展、提高實驗室生產(chǎn)力。借助于首要品牌Thermo Scientific、Applied Biosystems、Invitrogen、Fisher Scientific 和Unity Lab Services，我們將創(chuàng)新技術(shù)、便捷采購方案和實驗室運營管理的整體解決方案相結(jié)合，為客戶、股東和員工創(chuàng)造價值。欲了解更多信息，請瀏覽公司網(wǎng)站：www.thermofisher.com
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