非損傷微測(cè)技術(shù)（NMT）與激光共聚焦技術(shù)的比較

NMT和激光共聚焦技術(shù)的比較

什么是激光共聚焦

激光掃描共聚焦熒光顯微鏡（laser scanning confocal microscopy, LSCM）是一種利用計(jì)算機(jī)、激光和圖像處理技術(shù)獲得生物樣品三維數(shù)據(jù)、目前最先進(jìn)的分子細(xì)胞生物學(xué)的分析儀器。                   

主要用于觀察活細(xì)胞結(jié)構(gòu)及特定分子、離子的生物學(xué)變化，定量分析，以及實(shí)時(shí)定量測(cè)定等。其不僅可以得到非常清晰的熒光圖像，進(jìn)行多重?zé)晒鈽?biāo)記的定位和定量分析，還具有圖像三維重建、熒光共振能量轉(zhuǎn)移譜測(cè)定，甚至膜電位測(cè)定等功能，成為生命科學(xué)研究的重要技術(shù)手段。

激光共聚焦的局限

隨著激光共聚焦技術(shù)應(yīng)用范圍的擴(kuò)大，其在研究中的局限性也逐漸突顯。

激光共聚焦技術(shù)主要采集的是生物樣品內(nèi)部的離子分子信息，這些離子分子信息的改變既可能源于樣品內(nèi)部離子/分子源的變化，也可能源于樣品內(nèi)外的離子/分子交換。這兩種離子/分子變化過程是由完全不同的生命機(jī)制引發(fā)的。

這要求研究者必須通過其它實(shí)驗(yàn)結(jié)果，才能得出相對(duì)準(zhǔn)確的結(jié)論。若單純用激光共聚焦數(shù)據(jù)作為檢測(cè)或診斷標(biāo)準(zhǔn)，往往面臨較大的假陽性風(fēng)險(xiǎn)。

NMT對(duì)比激光共聚焦

共同點(diǎn)

• 實(shí)時(shí)

• 動(dòng)態(tài)

• 數(shù)據(jù)可視化

• 測(cè)定游離的離子

差異

激光共聚焦技術(shù)	非損傷微測(cè)技術(shù)
使用染料和激光光源	使用電極或者傳感器
需要標(biāo)記	無需標(biāo)記
熒光易發(fā)生淬滅	電極或者傳感器穩(wěn)定
測(cè)量時(shí)間短	測(cè)量時(shí)間可短，可長(zhǎng)
半活體（有損傷）	近似活體或者完全活體（測(cè)定無損傷）
檢測(cè)內(nèi)部的離子濃度變化	檢測(cè)跨膜的離子流速以及外部的離子濃度
測(cè)定種類較少，依賴于染料	測(cè)定種類多，可測(cè)Na+，K+，NO3-，O2等
測(cè)量材料不能太大，以細(xì)胞為主	測(cè)量材料不限，從細(xì)胞到整體都可以測(cè)量
只能同時(shí)測(cè)定一種離子	可以同時(shí)測(cè)定兩種離子

 

NMT可測(cè)樣品種類繁多

 

NMT可以同時(shí)測(cè)定兩種離子

結(jié)合

將激光共聚焦技術(shù)與非損傷微測(cè)技術(shù)(NMT)的結(jié)合，可以克服單純用激光共聚焦數(shù)據(jù)作為檢測(cè)或診斷標(biāo)準(zhǔn)面臨較大的假陽性風(fēng)險(xiǎn)，實(shí)現(xiàn)全面獲得被測(cè)樣品內(nèi)外的離子/分子流動(dòng)信息。實(shí)現(xiàn)內(nèi)外兼測(cè)。