細(xì)胞馮庫(kù)薩（VON KOSSA）染色試劑盒使用說明

細(xì)胞馮庫(kù)薩（VON KOSSA）染色試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

細(xì)胞馮庫(kù)薩（VON KOSSA）染色試劑是一種旨在使用銀還原技術(shù)，分析固定處理的細(xì)胞樣本中鈣沉積現(xiàn)象的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良VON KOSSA方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于動(dòng)物原生代或培養(yǎng)細(xì)胞的鈣沉積和鈣化結(jié)節(jié)檢測(cè)。廣泛用于骨細(xì)胞或組織病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

技術(shù)背景

鈣鹽變化是骨細(xì)胞增殖分化和骨組織成骨潛能的標(biāo)志之一。通過嗜銀染色，鈣離子受到強(qiáng)光還原，由金屬銀沉積取代，呈現(xiàn)黑色。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）  250毫升

固著液（Reagent B）   10毫升

染色液（Reagent C）   10毫升

平衡液（Reagent D）   10毫升

產(chǎn)品說明書    1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent C），避免光照；有效保證6月

用戶自備

核固紅復(fù)染試劑盒（40011）：用于常規(guī)染色后復(fù)染

60瓦燈：用于還原鈣離子

小型染色缸：用于細(xì)胞染色操作

光學(xué)顯微鏡：用于細(xì)胞染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

操作一：細(xì)胞載玻片染色

• 樣本固著處理
• 取出待測(cè)的細(xì)胞載玻片 
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升固著液（Reagent B），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 室溫下，孵育10分鐘
• 小心移去載玻片上的固著液（Reagent B）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7至8一次

二、樣本染色處理

• 小心加上200微升染色液（Reagent C），鋪滿整個(gè)載玻片樣品表面
• 室溫下置于太陽(yáng)光直射或60瓦燈直射孵育60分鐘；或直至可見黑色
• 小心移去載玻片上的染色液（Reagent C）
• 室溫下，小心將載玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）

三、 樣本復(fù)染處理

• 小心加上200微升平衡液（Reagent D）在載玻片上，鋪滿整個(gè)載玻片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘（注意：平衡液（Reagent D）具有褪色調(diào)節(jié)作用）
• 小心移去載玻片上的平衡液（Reagent D）
• 室溫下，小心將載玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 樣本復(fù)染處理（核固紅）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：鈣沉積陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)黑色（如果復(fù)染：細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)粉紅色，細(xì)胞核呈現(xiàn)紅色）

操作二：24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

一、樣本固著處理

1．小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液

2．每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗生長(zhǎng)中的細(xì)胞表面

3．小心抽去每孔里的清理液（Reagent A）

4．每孔加入400微升固定液（Reagent B），覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面

5．在室溫下孵育10分鐘

6．小心抽去固定液（Reagent B）

7．每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗細(xì)胞表面

8．小心抽去清理液（Reagent A）

9．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7和8兩次

二、樣本染色處理

• 小心加上400微升染色液（Reagent C），覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
• 室溫下置于太陽(yáng)光直射或60瓦燈直射孵育60分鐘；或直至可見黑色
• 小心抽去染色液（Reagent C）
• 室溫下，小心加入400微升清理液（Reagent A）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent A）

三、 樣本復(fù)染處理

• 小心加上400微升平衡液（Reagent D），覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心抽去平衡液（Reagent D）
• 小心加入400微升清理液（Reagent A）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 樣本復(fù)染處理（核固紅）
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：鈣沉積陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)黑色（如果復(fù)染：細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)粉紅色，細(xì)胞核呈現(xiàn)紅色）

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次（細(xì)胞載玻片）和25次（1個(gè)24孔板）操作
• 操作時(shí)，須帶手套
• 所有操作在室溫下進(jìn)行
• 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面
• 樣品染色避免過度，肉眼可見黑色即可終止染色
• 建議使用核固紅復(fù)染試劑盒（40011），增強(qiáng)染色對(duì)比度
• 細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列組織細(xì)胞金屬元素染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰