冰凍切片神經元高爾基法染色試劑盒使用說明

冰凍切片神經元高爾基法染色試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

YIJI冰凍切片神經元高爾基法染色試劑是一種旨在使用親銀還原技術，分析固定處理的冰凍組織切片中神經元（neuron）、錐體細胞（pyramidal cell）、膠質細胞（glia cell）、少突觸膠質細胞（oligodendrocyte）和其它突起（process）尤其樹突（dendrites）形態(tài)學的權威而經典的技術方法。該技術經過精心改良傳統方法、成功實驗證明的。主要適用于冰凍腦組織或外周神經組織切片的相關神經細胞檢測。廣泛用于動物腦神經病理生理解剖學的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

技術背景

意大利科學家高爾基（Camillo Golgi）于1873年發(fā)明了神經細胞黑色反應的浸銀染色技術，從而開辟了神經系統形態(tài)結構、演變、單系發(fā)生、構建以及疾病等學科研究，并建立了神經學說。腦神經組織經固定，親銀染色后，呈現部分神經細胞完全染色，而其它神經細胞沒有任何著色的高度選擇性染色。

產品內容

YIJI固著液（Reagent A）  毫升

YIJI氧化液（Reagent B）  毫升

YIJI營養(yǎng)液（Reagent C）  毫升

YIJI強化液（Reagent D）  毫升

YIJI脫水液（Reagent E）  毫升

YIJI清理液（Reagent F）  毫升

YIJI染色液（Reagent G）  毫升

產品說明書  1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保證3月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

無菌手術刀和鑷子：用于解剖動物腦組織

小型玻璃染色缸或60毫米玻璃培養(yǎng)皿：用于組織切片處理的容器

火棉膠（collodion）：用于保護固著處理后的組織樣品

切片機：用于組織切片

明膠化載玻片和蓋玻片：用于切片后鋪片

中性樹脂：用于切片封片

光學顯微鏡：用于切片染色后觀察分析

實驗步驟

• 樣本固著處理

• 常規(guī)麻醉動物和手術（建議：使用生理鹽水由心臟處灌注三次，每次60毫升，去除血液直至澄清）
• 使用適量的YIJI固著液（Reagent A）灌注處理
• 即刻小心取出腦組織
• 小心放進到xx毫升YIJI固著液（Reagent A）里
• 室溫下浸泡孵育1小時
• 用無菌手術刀將腦組織切成0.5厘米厚的組織塊
• 即刻用無菌鑷子夾起組織塊 
• 小心轉移到xx毫升YIJI氧化液（Reagent B）里（20毫升/2塊組織塊）
• 室溫下浸泡孵育2周，避免光照
• 小心轉移到xx毫升YIJI營養(yǎng)液（Reagent C）里
• 室溫下浸泡孵育48小時，避免光照
• 小心轉移到xx毫升YIJI強化液（Reagent D）里
• 室溫下浸泡孵育48小時，避免光照（注意：可以孵育1周）
• 用綿紙吸干組織快
• 使用30％蔗糖處理、OCT包埋或使用用戶自備的火棉膠（8％collodion）包埋
• 放進－20℃冰箱里
• 取出組織塊，在－20℃條件下進行緩慢冰凍切片，為20至100微米厚，并鋪片在明膠化載玻片上
• 置于－20℃冰箱里保存

• 樣本染色處理

• 取出待測的20至100微米厚的冰凍組織切片 
• 小心加上xx微升YIJI脫水液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個樣品表面
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心移去切片上的YIJI脫水液（Reagent E）
• 重復實驗步驟2至4一次
• 室溫下，小心將切片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent F）
• 小心加上xx微升YIJI染色液（Reagent G），鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育48小時，直至呈現黑色，即刻終止，避免光照（注意：期間可以在顯微鏡下觀察；避免干化）
• 小心移去切片上的YIJI染色液（Reagent G）
• 室溫下，小心將切片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent F）
• （選擇步驟）進行復染操作（建議使用YIJI甲苯酚紫（CRESYL VIOLET）復染試劑盒－YIJI80052）
• 透明處理
• 放上蓋玻片或封片（中性樹脂）
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：神經元、錐體細胞、膠質細胞、少突觸膠質細胞（橢圓形如同串珠）和其它突起，呈現黑色（如果復染――細胞核呈現藍色，胞漿尼氏（體）物質呈現粉紅至紫色）

注意事項

• 本產品為20次操作
• 操作時，須戴手套
• 鋪片須使用明膠化載玻片，否則染色會掉片：第一用毛筆涂刷；第二保持濕潤3小時；第三用PARAFIN包裹后壓片
• 切片建議100至200微米，過厚和過薄不利于檢測神經細胞
• 有的組織采用冰凍切片易破碎，建議第一調整切片溫度；第二切片厚度在150微米以上；如果無法解決，建議使用石蠟切片等
• 建議使用玻璃染色缸
• 每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干
• 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
• 整個操作，在避光狀態(tài)下進行
• 染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察 
• 樣品染色后保存，避免光照
• 本公司提供系列組織細胞神經系統成分染色試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩(wěn)定
• 本產品經鑒定顯色清晰