上皮調(diào)節(jié)蛋白促進唾液腺腺樣囊性癌的肺轉(zhuǎn)移

研究背景：

唾液腺腺樣囊性癌（Salivary adenoid cystic carcinoma, SACC）是常見的唾液腺惡性腫瘤之一，其特點是腫瘤生長緩慢，侵襲性強，肺轉(zhuǎn)移率高，預(yù)后差。上皮調(diào)節(jié)蛋白是表皮生長因子家族的成員，有多種生物功能，如抑制某些腫瘤細(xì)胞生長、促進纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞生長。本研究旨在揭示上皮調(diào)節(jié)蛋白在SACC肺轉(zhuǎn)移及EMT過程中的作用機制，研究成果發(fā)表在《Theranostics》IF：8.854。該研究lncRNA芯片服務(wù)由伯豪生物提供。

研究思路：

研究結(jié)果：

1. 上皮調(diào)節(jié)蛋白在SACC組織中高表達，患者預(yù)后差

對SACC及SMG組織樣本中上皮調(diào)節(jié)蛋白的表達量進行qPCR定量，并經(jīng)免疫組織化學(xué)驗證，確定上皮調(diào)節(jié)蛋白在SACC中高表達，且上皮調(diào)節(jié)蛋白表達越高的SACC患者腫瘤組織越大，臨床分期越高。Kaplan-Meier生存分析顯示，就累積存活率及無轉(zhuǎn)移存活率而言，上皮調(diào)節(jié)蛋白高表達的SACC患者預(yù)后差。

2. 上皮調(diào)節(jié)蛋白誘導(dǎo)體外SACC細(xì)胞的預(yù)轉(zhuǎn)移，促進體內(nèi)SACC的肺轉(zhuǎn)移

SACC細(xì)胞中的作用，研究者通過建立上皮調(diào)節(jié)蛋白過表達OE細(xì)胞系及上皮調(diào)節(jié)蛋白敲除siEpiregulin細(xì)胞系等，對比發(fā)現(xiàn)上皮調(diào)節(jié)蛋白高表達的OE細(xì)胞系能促進細(xì)胞的EMT、遷移和侵襲過程，此外研究發(fā)現(xiàn)OE細(xì)胞系在小鼠模型中的轉(zhuǎn)移潛能顯著提高。

3. 上皮調(diào)節(jié)蛋白增加內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成及通透性

利用lncRNA芯片對OE和對照細(xì)胞系進行差異基因篩選及功能分析，熱圖和GO富集分析結(jié)果顯示除EMT外，血管生成也是顯著變化的重要生物過程。rhEpiregulin處理HPMECs，提高了細(xì)胞系的毛細(xì)血管形成，遷移及通透性。OE細(xì)胞系及SACC患者體內(nèi)均顯示血管生成因子VEGFA、FGF-2、IL-8顯著提高。

4. 外泌體增強腫瘤血管生成和血管通透性，促進SACC向肺轉(zhuǎn)移

SACC-83細(xì)胞系來源的外泌體可顯著提高細(xì)胞系的轉(zhuǎn)移特性，且可以轉(zhuǎn)運到內(nèi)皮細(xì)胞中，通過提高血管生成因子的表達，促進內(nèi)皮細(xì)胞的侵襲，內(nèi)皮管的形成及內(nèi)皮通透性。此外，一系列外泌體注射實驗發(fā)現(xiàn)外泌體可以促進腫瘤血管生成，提高血管通透性。此外，外泌體處理體內(nèi)小鼠肺轉(zhuǎn)移模型顯示，肺部轉(zhuǎn)移囊腫數(shù)量顯著增多。

5. 上皮調(diào)節(jié)蛋白積累的外秘體增強體外內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成活性

Western blot實驗證明OE外泌體中上皮調(diào)節(jié)蛋白是高表達的，研究發(fā)現(xiàn)OE外泌體處理的內(nèi)皮細(xì)胞上皮調(diào)節(jié)蛋白的表達量升高，管狀結(jié)構(gòu)增多，SiEpiregulin外泌體處理出現(xiàn)相反的結(jié)果。此外，OE外泌體處理HPMECs細(xì)胞系，血管生成因子VEGFA、FGF-2、IL-8的表達均提高。

6. 上皮調(diào)節(jié)蛋白積累的外泌體促進肺轉(zhuǎn)移前微環(huán)境的形成及遠端遠端轉(zhuǎn)移

研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)OE外泌體處理后，基底膜基質(zhì)毛細(xì)血管增多，血紅蛋白量增多，免疫缺陷小鼠的SACC肺轉(zhuǎn)移增強，小鼠肺部轉(zhuǎn)移前微環(huán)境的形成，表皮生長因子的表達顯著提高。

研究結(jié)論：

本研究通過高通量篩選及一系列體內(nèi)外實驗，報道了上皮調(diào)節(jié)蛋白的高表達能夠促進EMT過程，提高血管生成因子VEGFA、FGF-2、IL-8的表達，且能以外泌體的形式促進SACC向肺的轉(zhuǎn)移，并引起其他不良預(yù)后反應(yīng)。本研究揭示上皮調(diào)節(jié)蛋白可作為SACC肺轉(zhuǎn)移的潛在治療靶標(biāo)。