MD酶標儀在黃曲霉毒素定量檢測中的應用

一、黃曲霉毒素簡介

1.1 什么是黃曲霉毒素

黃曲霉毒素（AFT）是一類化學結(jié)構(gòu)類似的化合物，均為二氫呋喃香豆素的衍生物。黃曲霉毒素是主要是由黃曲霉(Aspergillus flaw)、寄生曲霉(Aspergillus parasitwus)和集峰曲霉(Aspergillusnomius)產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，在中國，目前產(chǎn)生黃曲霉毒素的產(chǎn)毒菌種主要為黃曲霉。

黃曲霉毒素廣泛存在于自然界中，在濕熱地區(qū)食品和飼料中出現(xiàn)黃曲霉毒素的機率最高。它們存在于土壤、動植物、各種堅果中，特別是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麥等糧油產(chǎn)品，是霉菌毒素中毒性最大、對人類健康危害極為突出的一類霉菌毒素。按照目前毒性分級，動物半數(shù)致死量＜10mg/kg體重的物質(zhì)為劇毒，而黃曲霉毒素B1的半數(shù)致死量僅為0.36mg/kg體重，屬特劇毒的毒物范圍。

2017年10月27日，世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)公布的致癌物清單初步整理參考，黃曲霉毒素在一類致癌物清單中。

 

1.2 發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素

1960年，英國發(fā)現(xiàn)有10萬只火雞死于一種以前沒見過的病，被稱為“火雞X病”，再后來鴨子也被波及。追根溯源，最大的嫌疑是飼料。這些火雞和鴨子吃的是花生餅�；ㄉ�餅是花生榨油之后剩下的殘渣，富含蛋白質(zhì)，是很好的禽畜飼料。這些花生餅被一種來自真菌的有毒物質(zhì)污染，經(jīng)過進一步研究和確認后，人們發(fā)現(xiàn)了是黃曲霉(Aspergillus.flavus)產(chǎn)生的有毒代謝物質(zhì)，黃曲霉毒素(Aflatoxins)，是一種黃曲霉和寄生曲霉的代謝產(chǎn)物。

 

1.3 黃曲霉毒素的分類、化學結(jié)構(gòu)以及物理化學特性

霉菌毒素有300種之多，其中包括黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮/F2毒素、赭曲霉毒素、T2毒素、嘔吐霉毒素/脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、伏馬霉素/煙曲霉毒素等。其中黃曲霉毒素(Aflatoxins)是到目前為止所發(fā)現(xiàn)的毒性最大的真菌毒素，目前已分離鑒定出B1、B2、M1、M2、G1、G2、P1、Q和H1等近20種于該類的毒素。它們的化學結(jié)構(gòu)類似，都是二氫呋喃和香豆素的衍生物，其中黃曲霉毒素分子中的雙呋喃環(huán)結(jié)構(gòu)是產(chǎn)生毒性的重要結(jié)構(gòu)，不同類型黃曲霉毒素結(jié)構(gòu)有所不同，其毒性(從大到小)也有所差異(B1、M1、G1、B2)。黃曲霉毒素主要有4種：即B1、B2、G1、G2，其中B1被認為是主要的有毒物質(zhì)，有2種這些毒素的代謝產(chǎn)

物M1和M2。其中黃曲霉毒素B1主要存在于農(nóng)產(chǎn)品，動物飼料，中藥等產(chǎn)品中；黃曲霉毒素M1是動物攝入黃曲霉毒素B1后在體內(nèi)經(jīng)羥基化代謝的產(chǎn)物，一部分從尿和乳汁排出，一部分存在于動物的可食部分，如乳、肝、蛋類、腎、血和肌肉中，其中以乳最為常見。黃曲霉毒素M1的毒性和致癌性與黃曲霉毒素B1的基本相似。其中黃曲霉毒素B1(CAS號1162-65-8)的分子式：

C17H12O6，分子量為：312.27

1.4 黃曲霉毒素的毒性以及臨床表現(xiàn)特征

1993年黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織(WHO)的癌癥研究機構(gòu)劃定為1類致癌物，是一種毒性極強的劇毒物質(zhì)，具有嚴重的致癌性、致畸性和致突變性。黃曲霉毒素-tRNA加成物能抑制tRNA與某些氨基酸結(jié)合的活性對蛋白質(zhì)生物合成中的必需氨基酸，如賴氨酸亮氨酸，精氨酸和甘氨酸與tRNA的結(jié)合均有不同的抑制作用，從而在翻譯水平上干擾了蛋白質(zhì)生物合成影響細胞代謝。其毒性相當于氰化鉀的10倍，砒霜的68倍。動物攝入黃曲霉毒素后，在肝臟中分布最多，含量可為其他器官組織的5-15倍。腎、脾和腎上腺中亦可檢出，血液中有極微量，肌肉中一般檢不出，如果黃曲霉毒素如不連續(xù)攝入，一般不在體內(nèi)蓄積。由于其對人及動物肝臟組織有破壞作用，嚴重時可導致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中以黃曲霉毒素B1最為多見，其毒性和致癌性也最強。黃曲霉毒素含量在30~50μg/kg時為低毒，50~100μg/kg時為中毒，100~1000μg/kg時為高毒，1000μg/kg以上為極毒。黃曲霉毒素中毒的癥狀一般為一過性發(fā)燒、嘔吐、厭食、黃疸、腹水、下肢浮腫等肝中毒癥狀，嚴重者出現(xiàn)暴發(fā)性肝功能衰竭、死亡。有三種臨床表現(xiàn)特征，即急性中毒、慢性中毒和致癌性；黃曲霉毒素其純品為無色結(jié)晶，在紫外線下黃曲霉毒素B1、B2發(fā)藍色熒光，而黃曲霉毒素G1、G2 發(fā)綠色熒光。黃曲霉毒素的相對分子量為312-346。難溶于水，易溶于油，甲醇丙酮和氯仿等有機溶劑，但不溶于石油醚己烷和乙醚中。一般在中性溶液中較穩(wěn)定，但在強酸性溶液中稍有分解，在pH9-10的強堿溶液中迅速分解。耐高溫黃曲霉毒素B1的分解溫度為268℃紫外線對低濃度黃曲霉毒素有一定的破壞性。

 

• 急性中毒：它的毒害作用，無論對任何動物，肝臟變化，呈急性肝炎、出血性壞死、肝細胞脂肪變性和膽管增生。脾臟和胰臟也有輕度的病變。

• 慢性中毒：其主要變化特征為肝臟出現(xiàn)慢性損傷，如肝實質(zhì)細胞變性、肝硬化等。出現(xiàn)動物生長發(fā)育遲緩，體重減輕，母畜不孕或產(chǎn)仔少等系列癥狀。

目錄

一、黃曲霉毒素簡介

1.1 什么是黃曲霉毒素
1.2 發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素

1.3 黃曲霉毒素的分類、化學結(jié)構(gòu)以及物理化學特性

1.4 黃曲霉毒素的毒性以及臨床表現(xiàn)特征

1.5 黃曲霉毒素危害性

1.5.1 黃曲霉毒素與動物疾病

1.5.2 黃曲霉毒素與人類健康

1.6 預防措施和抵抗方法

二、黃曲霉毒素檢測方法和標準

2.1 檢測方法發(fā)展歷程、趨勢

2.2 檢測方法分類

2.2.1 生物鑒定法：
2.2.2 化學分析法：
2.2.3 儀器分析法：
2.2.4 免疫分析法：

2.3 黃曲霉毒素檢測技術(shù)現(xiàn)狀與展望

2.4 目前黃曲霉毒素檢測流程及最終判別方式

三、黃曲霉毒素檢測儀器、試劑、方法簡單介紹
3.1 酶聯(lián)免疫法（酶聯(lián)免疫吸附篩查法）
3.1.1 原理與步驟：

3.1.2 推薦試劑：

3.1.3 推薦儀器：

3.1.4 舉例之競爭ELISA方法進行黃曲霉毒素B1含量檢測

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