常州百代生物RFect單核細胞小核酸siRNA轉(zhuǎn)染試劑/miRNA轉(zhuǎn)染試劑使用說明書

RFect^MN單核細胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑                                                        

貨    號：BIOG-11024: 0.5ml

           BIOG-11025: 1.0ml     

           BIOG-11026: 1.5ml                                      

儲存條件：-20℃

產(chǎn)品特點                                                               

應    用 

產(chǎn)品介紹  

RFect^MN單核細胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑是我公司研發(fā)團隊在RFect細胞株小核酸轉(zhuǎn)染試劑的基礎上加以改進研發(fā)成功的專門用于單核細胞小核酸轉(zhuǎn)染的試劑。RFect^MN可用來轉(zhuǎn)染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以內(nèi)的小分子RNA和DNA，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)單核細胞。目前，無論國外還是國內(nèi)，單核細胞的核酸轉(zhuǎn)染都是個熱點難題，市場還缺乏真正有效的商品化的單核細胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑。RFect^MN能夠高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)單核細胞，獲得比較理想的基因敲除效果。對于大多數(shù)單核細胞，RFect^MN的細胞轉(zhuǎn)染陽性率都在75%以上，而轉(zhuǎn)染細胞死亡率不到10%。RFect^MN的使用也極其簡便，先將sRNA與RFect^MN室溫混合，再將siRNA-RFect^MN混合物直接加入含培養(yǎng)基的細胞，血清對轉(zhuǎn)染效果沒有影響，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液。有關RFect^MN單核細胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑的材料合成和試劑配制我們已申請了國際專利，并通過PCT覆蓋國際上多個國家和地區(qū)。 

操作步驟：本說明書適用于24孔培養(yǎng)板的轉(zhuǎn)染實驗，其他規(guī)格的培養(yǎng)板的用量參照下面表格，表格給出的是每孔的用量與體積。

A. 細胞接種：轉(zhuǎn)染前一天接種細胞，每孔 500 μl 培養(yǎng)基（不可加抗生素），使細胞在轉(zhuǎn)染時密度在30-40% 。

B. siRNA-RFect^MN混合物準備：

• 6pmol siRNA 用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋。
• 2μl RFect^MN用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋。輕輕混勻，室溫孵育5min。注意：確保在25 min內(nèi)執(zhí)行第三步操作，不要過于延遲。
• 孵育5min后，將siRNA 稀釋液與RFect^MN稀釋液混合（總體積100μl）。輕輕混勻，室溫孵育20 min。

C. 將混合物加到培養(yǎng)的細胞內(nèi)（完全培養(yǎng)基培養(yǎng)）：

• 將100μl混合物加入培養(yǎng)孔內(nèi)，培養(yǎng)孔內(nèi)含有0.5ml培養(yǎng)的細胞。輕輕晃動培養(yǎng)板5min，混勻。
• 37°C培養(yǎng)48-72h，檢測基因抑制效果。如果需要，細胞培養(yǎng)4-6h時可以更換培養(yǎng)基，但不是必須。孵育時間的長短，取決于細胞類型、

所干擾基因本身及分析方法�？稍O置不同的孵育時間進行實驗以確定最佳孵育時間。

轉(zhuǎn)染實驗優(yōu)化: 為了提高轉(zhuǎn)染效率，最好對轉(zhuǎn)染條件進行優(yōu)化，特別是首次使用。例如：24孔培養(yǎng)板，調(diào)整 siRNA與RFect^MN試劑的用量。siRNA用量在6-60 pmol (final concentration 10- 100 nM)之間調(diào)整，RFect^MN試劑用量在1.0 - 3.0μl之間調(diào)整。

轉(zhuǎn)染實驗要點

• 轉(zhuǎn)染過程不可添加抗生素，否則會導致細胞死亡；
• 首次實驗siRNA的用量設置在終濃度10nM、30nM、50nM、100 nM進行摸索 ，后續(xù)實驗根據(jù)實驗結果修改。