最主流的細胞活力檢測方法—CTG(CELL TITER-GLO)發(fā)光法簡介

細胞增殖檢測技術(shù)已廣泛應用于分子生物學、遺傳學、腫瘤生物學、免疫學、藥理和藥代動力學等研究領(lǐng)域。細胞增殖是指細胞在周期調(diào)控因子的作用下，通過DNA復制、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成等復雜反應而進行的分裂系列過程。細胞通過分裂的方式增殖，細胞增殖是生物體的重要生命特征 。單細胞生物以細胞分裂的方式產(chǎn)生新個體，多細胞生物以細胞分裂的方式產(chǎn)生新的細胞，從而補充體內(nèi)衰老和死亡的細胞。細胞增殖的同時，在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞，活細胞在總細胞中所占的百分比叫做細胞活力。

檢測細胞存活與增殖的方法主要包括觀察DNA合成含量和檢測細胞代謝活性兩種，前者主要是DNA前體物質(zhì)（胸腺嘧啶核苷類似物）摻入法，比如BRDU、EDU法；后者主要為MTT、XTT、MTS、CCK-8、WST-1及WST-8法等，在后者中現(xiàn)在最主流的就是CTG(CELL TITER-GLO)發(fā)光法，此法可快速靈敏的檢測活細胞數(shù)量，市場上常用的是Promega公司CellTiter-Glo化學發(fā)光細胞活性檢測試劑盒。

ATP腺嘌呤核苷三磷酸(簡稱三磷酸腺苷)參與生物體內(nèi)多種酶促反應，是活細胞新陳代謝的一個指標，其含量直接反應了細胞的數(shù)量及細胞狀態(tài)：實驗過程中向細胞培養(yǎng)基加入等體積CellTiter-Glo™試劑，測量發(fā)光值，在光信號和體系中，發(fā)光值與ATP量成正比，而ATP又和活細胞數(shù)正相關(guān)，因此可通過檢測ATP含量得細胞活力。同普通的MTT、CCK8法相比，CellTiter-Glo™發(fā)光活細胞檢測系統(tǒng)的檢測試劑具有最高靈敏度和較長的信號持續(xù)時間，此系統(tǒng)已經(jīng)廣泛地應用在生命科學研究領(lǐng)域中，如一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等，各實驗室已普遍使用此技術(shù)。此法還有很多優(yōu)點，如細胞活性分析是高效的“加樣－混合－測量”系統(tǒng)，實驗操作方便快捷，同時節(jié)約細胞用量。CellTiter-Glo™試劑和細胞培養(yǎng)中的常用培養(yǎng)基兼容，如RPMI1640、MEM、DMEMand Ham's F12，也不受酚紅和有機溶劑的影響，誤差小，準確率高。同MTT、CCK8法具體對比可見下表：