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轉(zhuǎn)基因玉米品系98140核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)使用說明書

瀏覽次數(shù):2786 發(fā)布日期:2018-6-4  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負

轉(zhuǎn)基因玉米品系98140核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

產(chǎn)品說明

 轉(zhuǎn)基因檢測系列可針對食品、飼料等樣品中轉(zhuǎn)基因成分的特異核酸片段進行擴增,通過實時擴增曲線判定結(jié)果。本產(chǎn)品用于轉(zhuǎn)基因玉米品系98140核酸的檢測,檢出限為0.1%

產(chǎn)品組成( 48測試)

042032M

試劑

含量

A-98140-P

1000μL ×1支

NG-P

 100μL × 1支

PG-98140-P

 100μL × 1支

適用儀器

    熒光PCR儀(ABI 7500,CFX 96,Mx 3005P,LineGene9600)等PCR擴增儀。

自備耗材和儀器

       ①滅菌1.5mL或2.0mL離心管;②滅菌0.2mL PCR管或八聯(lián)管;③冰盒;④移液器(11-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套滅菌吸頭;⑤離心機;⑥渦旋混勻器;⑦金屬;⑧均質(zhì)機、攪拌機或研缽等研磨器具;⑨電子天平。

注意事項

1.本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染,實驗要分區(qū)操作。

   1)第一區(qū):試劑準備區(qū)。

   2)第二區(qū):樣本制備區(qū)。

   3)第三區(qū):擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。

   ★ 分區(qū)之間最好進行物理性隔離,避免人為因素造成的污染。

2. 實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套,使用移液器,試驗產(chǎn)生的所有廢棄物及時處理。

3.嚴格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰上操作。

4.反應液中的成分對光敏感,應避光保存。試劑使用前要完全解凍,但應避免反復凍融,推薦使用前離心30秒,并按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。

5.反應結(jié)束后,擴增管請置于密封袋內(nèi)丟棄,當日清理,開蓋易造成氣溶膠污染,禁止開蓋。

6.不同批號試劑請勿混合使用,在有效期內(nèi)使用。

樣品處理

參照《GB/T 19495.3-2004 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測 核酸提取純化方法》或其他標準處理樣品,制備的樣本保存待用。

詳細步驟請按照標準操作或查閱食安通軟件。

◆ 實驗操作

將試劑完全解凍,各組分離心30s。

1.試劑配制(試劑準備區(qū),放置于冰盒中進行):

若有N個待檢樣品,則參照下表,按照N+2個數(shù)量計算反應液用量(N個待檢樣品+1個陰性對照+1個陽性對照),渦旋混勻,離心30s,分裝于0.2mL PCR管中。

 

試劑

使用量

A-98140-P

20×(N+2)μL

反應液總體積

20×(N+2)μL

  1. 模板制備(樣本制備區(qū))

建議使用配套植物基因組DNA提取系列產(chǎn)品,具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

3.添加模板(樣本制備區(qū),放置于冰盒中進行)

    在步驟1中已含有反應液的PCR管中分別加入5μL模板,順序為NG-P、待測樣品模板、PG-98140-P。渦旋混勻30s,離心1min,立即進行PCR擴增反應。

4. 擴增反應(擴增及產(chǎn)物分析區(qū))

使用熒光定量PCR儀,熒光基團選擇FAM,淬滅基團選擇TAMRA。

按下列條件設(shè)置擴增反應:

PCR循環(huán)

熒光收集位點

  95℃  

10分鐘

1個循環(huán)

  95℃   

15秒

45個循環(huán)

  60℃   

1分鐘

6.基線和閾值設(shè)定

基線調(diào)整取3-15個循環(huán)的熒光信號,閾值線應超過陰性對照擴增曲線的最高點。

結(jié)果判定

檢測樣品無Ct值,曲線為直線或輕微斜線,無“S”型擴增曲線,可報告樣品陰性,不含有轉(zhuǎn)基因玉米品系98140

成分或含量低于檢測限;

檢測樣品Ct<40,曲線呈“S”型擴增曲線,可直接報告樣品陽性,含有轉(zhuǎn)基因玉米品系98140成分;

檢測樣品Ct≥40,可直接報告樣品陰性,不含有轉(zhuǎn)基因玉米品系98140成分或含量低于檢測限。

  • NG反應為平滑直線,PG反應為“S”型擴增曲線,此次檢測結(jié)果有效,否則無效。如重復檢測結(jié)果仍為無效,請與技術(shù)支持人員聯(lián)系。
來源:上海一基實業(yè)有限公司
聯(lián)系電話:021-60536261
E-mail:2851717098@qq.com

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