外泌體微泡非特異性標(biāo)志物總結(jié)分析

外泌體微泡作為細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)的重要媒介，越來越多的研究揭示其作為重大疾病生物標(biāo)志物的臨床價(jià)值。當(dāng)前外泌體微泡快速，高通量，多參數(shù)的主流分析方法仍為流式分析法。流式分析法主要依賴散射光或者熒光設(shè)定分析閾值，劃門分析。然而由于外泌體微泡體積遠(yuǎn)小于細(xì)胞，散射光信號(hào)弱，傳統(tǒng)流式散射光檢測(cè)靈敏度低，需借助熒光標(biāo)記才可分析外泌體微泡。其中，非特異熒光標(biāo)記為外泌體微泡總量分析較為普遍的方法

近日de Rond等人系統(tǒng)研究適合外泌體微泡非特異標(biāo)記的理想標(biāo)志物，詳細(xì)分析Calcein AM，  Calcein violet，  CFSE，  Di-8-ANEPPS和Lactadherin（另外，因Annexin V和Lactadherin同樣結(jié)合膜磷脂成分，并且依賴于鈣離子，無法適用于血液等樣品直接標(biāo)記，膜磷脂結(jié)合效率遠(yuǎn)低于Lactadherin，故不在此研究范圍內(nèi)）等不同類型標(biāo)記物。因不同標(biāo)志物標(biāo)記外泌體微泡效率明顯不同，并且對(duì)蛋白質(zhì)聚集體，脂蛋白，細(xì)胞碎片等物質(zhì)的干擾敏感性不同，其效能比較分析需要非常嚴(yán)格的對(duì)比信息方有意義。de Rond等人首次借用Apogee納米流式超高的散射光靈敏度和分辨率，作為不同標(biāo)志物標(biāo)記效能分析的參考標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合MCF7細(xì)胞上清和血小板外泌體微泡樣本，詳細(xì)比較了上述5種標(biāo)志物識(shí)別外泌體微泡的效能情況。

研究統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，Di-8-ANEPPS, Lactadherin和超靈敏散射光可以檢測(cè)到100% 的EpCAM+ MCF7 外泌體微泡（圖1）；Lactadherin和超靈敏散射光可分別檢測(cè)到33%和d 61% 的血小板 CD61+外泌體微泡（圖2）。只有在血小板蛋白質(zhì)雜志去除后，Di-8-ANEPPS才可以特異識(shí)別結(jié)合外泌體微泡。Calcein AM，  Calcein violet和 CFSE則是檢測(cè)靈敏度相對(duì)較差或極易引起集群檢測(cè)問題的標(biāo)志物。因此，截止目前還沒有能夠同時(shí)滿足：標(biāo)記所有外泌體微泡，特異性足夠高，與抗體標(biāo)記兼容，適用生物體液樣本直接標(biāo)記，標(biāo)記檢測(cè)時(shí)間低于8小時(shí)等條件的非特異標(biāo)志物。 然而，該研究也反映出針對(duì)不同外泌體微泡樣品，選擇合適的熒光標(biāo)志物，結(jié)合Apogee納米流式超靈敏散射光，仍會(huì)是當(dāng)前外泌體微泡流式分析的最佳選擇，快速，精準(zhǔn)，可靠。 

圖1，EpCAM+ MCF7 外泌體微泡散射光和熒光標(biāo)志物流式分析

圖2，血小板外泌體微泡散射光和熒光標(biāo)志物流式分析

參考文獻(xiàn)

de Rond, Leonie, et al. "Comparison of Generic Fluorescent Markers for Detection of Extracellular Vesicles by Flow Cytometry." Clinical chemistry 64.4 (2018): 680-689.

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