普魯士藍染色液(核固紅法)使用說明書

普魯士藍染色液(核固紅法)

產(chǎn)品簡介：

含鐵血黃素(Hemosiderin)是一種血紅蛋白源性色素，為金黃色或棕黃色顆粒，因其含鐵，且為金黃色，故稱為含鐵血黃素。當(dāng)紅細胞被巨噬細胞吞噬后，在溶酶體酶的作用下，血紅蛋白被分解為不含鐵的橙色血質(zhì)和含鐵的含鐵血黃素。Perls普魯士藍反應(yīng)(Prussian blue reaction)又稱為含鐵血黃素染色，即經(jīng)過亞鐵氰化鉀和稀酸處理后可以產(chǎn)生藍色，常見于吞噬細胞或間質(zhì)內(nèi)，其染色原理在于亞鐵氰化鉀溶液使三價鐵離子從蛋白質(zhì)中被稀鹽酸分離出來，三價鐵與亞鐵氰化鉀反應(yīng)，生成一種不溶解的藍色化合物即三價鐵的亞鐵氰化物。

NobleRyder普魯士藍染色用于顯示局部組織內(nèi)的各種出血性病變，常見于吞噬細胞內(nèi)，可以很好地區(qū)分含鐵血黃素與其他色素。該染色液穩(wěn)定性好、可以長期保存、不易產(chǎn)生沉淀、應(yīng)用范圍廣，可以進行復(fù)染。該染色液的復(fù)染液采用核固紅，是最經(jīng)典、最常用的復(fù)染液。

產(chǎn)品組成：

編號 名稱		D3801 2×50ml		D3801 2×100ml		Storage
試劑(A):	A1: Perls stain A	25ml		50ml		RT
Perls stain	A2: Perls stain B	25ml		50ml		RT
臨用前，取A1、A2等量混合即為		Perls stain，不宜提前配制。
試劑(B): 核固紅染色液		50ml	100ml		RT 避光
使用說明書		1份

自備材料：

1、固定液：10%中性福爾馬林、4%多聚甲醛等。

2、系列乙醇

操作步驟(僅供參考)：

(一)石蠟切片染色：

1、組織固定于10%中性福爾馬林，常規(guī)脫水包埋。

2、切片厚度4μm，常規(guī)脫蠟至水。

3、蒸餾水水洗 1min。

4、切片入Perls stain(見注意事項2)，浸染15～30min。

5、蒸餾水充分沖洗2～5min。

6、入核固紅染色液，淡染細胞核5～10min。

7、自來水沖洗1～5s。

8、常規(guī)脫水透明，中性樹膠封固

(二)冰凍切片染色：

1、無需脫蠟，直接迅速用蒸餾水沖洗2～3min。

2、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟，時間可以相應(yīng)縮短。

(三)細胞染色：

1、4%多聚甲醛固定10～20min。

2、自來水沖洗2次，每次2min。

3、蒸餾水沖洗2次，每次2min。

4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟，時間可以相應(yīng)縮短

染色結(jié)果：

含鐵血黃素或三價鐵	藍色
細胞核、其他組織	紅色

陰性對照(可選)：取相同切片脫蠟至水。入5%草酸孵育2～6h，經(jīng)Perls stain，其余步驟同上。結(jié)果為陰性。

注意事項：

1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。組織固定常采用10%中性福爾馬林，經(jīng)普通福爾馬林長期固定后，組織會有損傷。避免使用酸性固定劑，鉻酸鹽處理也會妨礙鐵的保存。

2、整個操作過程中容器要干凈，避免用金屬鐵制品，洗切片和容器時以蒸餾水為宜，因普通水內(nèi)含鐵質(zhì)。Perls stain 染色時，應(yīng)根據(jù)樣本情況調(diào)整著色時間。

3、所有切片都應(yīng)使用同一個陽性對照切片，選擇適合的對照非常重要。尸檢肺組織是一個很好的對照，包含相當(dāng)數(shù)量的鐵陽性巨噬細胞(心衰細胞)。

4、冰凍切片和細胞染色，最好根據(jù)具體情況摸索實驗條件。

有效期：12個月有效。