關(guān)于活性氧分子熒光探針標記法的應用介紹

活性氧分子檢測有新方法了，您知道嗎？

眾所周知，氧氣是生命運動過程中不可缺少的一種氣體,而細胞使用氧氣時會產(chǎn)生副產(chǎn)品，以高能氧氣分子形式存在的廢棄物質(zhì)即為自由基。自由基會對人體組織和細胞結(jié)構(gòu)造成損害，我們把這種損害稱為氧化應激，人體在利用氧氣過程中會加重自身的壓力。活性氧(ROS)是含有氧的化學活性分子，ROS是需氧細胞在代謝過程中產(chǎn)生的一系列活性氧簇（ReactiveOxygenSpecie），包括：O2·-、H2O2及HO2-·以及-OH等。

目前研究發(fā)現(xiàn)ROS可雙向調(diào)控某些腫瘤細胞的凋亡和增殖，并發(fā)現(xiàn)了自由基與細胞信號轉(zhuǎn)導之間的內(nèi)在關(guān)聯(lián)。例如DNA損傷，以前的研究表明癌細胞要比正常的細胞積累著更多的ROS，而且癌細胞中水平增高的ROS一直被認為一件不好的事情，促進細胞中DNA損傷、遺傳不穩(wěn)定性和藥物抗性。

目前細胞內(nèi)ROS含量水平通常采用化學發(fā)光法、紫外-可見吸收分光光度法、熒光光度法、電子自旋探針以及選擇性電極法等。目前較為普通的方式是熒光探針標記方法，檢測是基于由偶氮二異丁脒鹽酸鹽(2,2’-azobis-2-methyl-propanimidamidedihydrochloride，AAPH)熱解產(chǎn)生的過氧自由基，在氧自由基吸收物質(zhì)存在的條件下與熒光素反應，從而影響熒光信號強度。氧自由基吸收物質(zhì)的能力越強，清除的過氧自由基也就越多，熒光信號持續(xù)的時間也就越長。與化學發(fā)光一樣,熒光探針法同樣也是靈敏度高的一種檢測方法。由于綠色熒光檢測和成像易受細胞自發(fā)熒光的影響，因此遠/近紅外染料常被用來檢測ROS含量從而避免細胞自發(fā)熒光的干擾。

MD的SpectraMax®iD5多功能微孔讀板機采用超冷型PMT和“2X2”光柵光路設(shè)計，可有效降低信號背景減少雜散光，為遠紅外熒光檢測提供更寬的動態(tài)范圍和更高的靈敏度。如何利用SpectraMaxiD5多功能微孔讀板機和2個熒光檢測試劑盒來進行胞內(nèi)ROS含量分析？在SpectralOptimizationWizard（光譜自動優(yōu)化）幫助下，優(yōu)化了遠紅外分析檢測下激發(fā)光和發(fā)射光的不同波長組合，并最終比較了綠色熒光檢測和遠紅外熒光檢測結(jié)果的表現(xiàn)。點擊上方按鈕，了解詳情吧！