Fast DNA 試劑盒及具體實驗流程步驟介紹

       FastDNA 試劑盒可從廣闊的各種來源中快速有效地分離出 genomic DNA，配套 FastPrep 儀器使用。動植物組織、細菌、海藻、真菌和其他許多標本，在 40 秒內(nèi)容易被裂解。這個 benchtop 設(shè)備是一種專利性的垂直角度運動，這種運動使得裂解微粒能同時從多方向、同步地碰撞。
       FastPrep 儀器提供一種極其快速、有效、高度可重復勻質(zhì)化，超過了用酶消化、超聲破碎儀、渦旋、混合傳統(tǒng)提取方法。標本放在裝有 Lysing Matrix A 的 2.0 ml 試管中。同時幾乎全部的標本很容易用預先填充化合物進行加工，另外，1/4 英尺的陶球用來加工堅硬的標本，比如：骨頭、軟骨和種子。在有 CLS 專樣下,用 Lysing Matrix A 處理,在 FastPrep 儀器中將會勻漿化。對植物組織來說, CLS-VF 用來和 PPS 連用。酵母、海藻和真菌在CLS-Y 中被裂解。CLS-TC 是用來裂解其他所以標本。為了獲得最大的柔韌性，試劑會提供所有的緩沖液。裂解之后，標本被離心到 pellet debris 和 lysing matrix。通過硅土基質(zhì) GENECLEAN 程序 DNA 被純化。提取的 DNA 準備用來消化、電泳、PCR 和其他任何期望的用途。

適用研究范圍：
       動植物組織、細菌、酵母、藻類和真菌中分離基因組試劑盒 

試劑盒組成：

品名	規(guī)格
Lysing Matrix A	100*2 ml tubes
1/4 Ceramic Spheres	100 spheres
Binding Matrix	66 ml
Concentrated SEWS-M	12 ml
DES	25 ml
CLS-VF	90ml
PPS	25ml
CLS-TC	110ml
CLS-Y	110ml
User manual	1 each
MSDS	1 each
Certificate of Analysis	1 each

 
實驗者需自備的儀器及耗材
FastPrep® Instrument （fastprep 儀器）
Microcentrifuge that can freely spin 2.0 ml tubes （可裝載 2.0ml 管子的離心管） Microcentrifuge tubes (2.0 ml and 1.5 ml) （可裝載 1.5 和 2.0ml 管子的微型離心管） Rotator or low-speed vortex
(Optional) SPIN Filters and Catch Tubes, 100
 
操作步驟
1. 添加標本到 Lysing Matrix A 管中。
在水中或者是等滲鹽溶液中，放置 100-200 mg 組織（新鮮、冰凍、干燥等）或者200μl細胞懸浮
液。對于細菌、酵母、海藻、或者是組織培養(yǎng)細胞是在懸浮液中生長，離心充足的培養(yǎng)體積，以便提供 50-100 mg 濕重的小球尺寸的標本。（在水或者等滲鹽溶液中重新懸浮小球，獲得 200 μl 的最大懸浮體積。）
 
2. 根據(jù)下表添加適當?shù)?CLS。 

Processing Tissue From:	Add to Sample Tube:
Plant tissue	800μl CLS-VF and 200 μl PPS
Animal tissue, cultured cells, insects, bacteria, bone, etc.	1.0 ml CLS-TC
Yeast,algae or fungi	1.0 ml CLS-Y

3. 在 FastPrep 儀器中用 6.0 設(shè)置的速度勻質(zhì)化 40 秒鐘。

4. 以 14,000 轉(zhuǎn)離心 5-10 分鐘到 pellet debris。

5. 轉(zhuǎn)移 600 --700μl 的懸浮液到一支 2.0 ml 微型離心管，加同等體積的Binding Matrix， 顛倒混勻。
注釋：在和下步之間，全部體積的完全混合，使用一支足夠大的試管來提供空間是很重要的。不建議使用圓錐底的試管。在這步一支 2.0 ml 微型離心管就足夠了。

6. 在室溫的條件下，攪拌器一般攪拌 5 分鐘進行孵育。 
注釋：一臺低速的旋渦機在這步可以用，但是操作必須小心，以免除去 DNA。

7. 在 14,000 轉(zhuǎn)離心 10 秒鐘到pellet Binding Matrix，去除上清液（懸浮液）。

8. 添加 500μl 備好的 SEWS-M，用吸量管輕輕地吹動液體的力量使小球重新懸浮。
注釋：確保酒精加到濃縮的，參看 3.1 部分。

9. 14,000 轉(zhuǎn)離心 1 分鐘，去除上清液。
注釋：用旋轉(zhuǎn)式移液器轉(zhuǎn)移重新懸浮的Binding Matrix 到另一只旋轉(zhuǎn)式移液器。用 14,000 轉(zhuǎn)離心 1 分鐘，去除槍頭管里的物質(zhì)。

10. 用 14,000 轉(zhuǎn)離心 10 秒鐘，用小的吸量管移動剩余液體。
注釋：如果用一支，用 14,000 轉(zhuǎn)離心第二次，用新的干凈的試管替代 the Catch Tube。 

11. 在 100μl 的 DES 中，通過輕輕地重新懸浮的Binding Matrix 洗提 DNA。
 
12. 用 14,000 轉(zhuǎn)離心 1 分鐘，轉(zhuǎn)移洗提的 DNA 到干凈的微型離心管中。DNA 可為下游應(yīng)用作準備。為延長有效期將它存儲在-20°C 或者是 4°C，直到使用。
注釋：用一支吸量管小心轉(zhuǎn)移DNA，以避免轉(zhuǎn)移帶有洗提 DNA 的 Binding Matrix 微粒，避免 shearing。注釋：用 SPIN 移液器，在 14,000 轉(zhuǎn)離心 1 分鐘，將洗提的DNA 放入干凈的catch tube。DNA 可為下游應(yīng)用作準備。為延長有效期將它存儲在-20°C 或者是 4°C，直到使用。