穩(wěn)定同位素標(biāo)記 SILAC 技術(shù)實(shí)驗(yàn)流程簡(jiǎn)介

一、SILAC概述
         SILAC即細(xì)胞培養(yǎng)條件下穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)(Stable isotope labeling with amino acids in cell culture，SILAC)，其基本原理是在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，采用含有輕、中、重同位素型必需氨基酸的培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，用于SILAC主要的穩(wěn)定同位素氨基酸是Lys和Arg, 細(xì)胞在傳代培養(yǎng)過(guò)程中同位素氨基酸將被細(xì)胞用于合成蛋白質(zhì)，細(xì)胞經(jīng)傳代培養(yǎng)5-6代后，細(xì)胞的所有蛋白質(zhì)將被同位素標(biāo)記，等量混合標(biāo)記的蛋白質(zhì)后經(jīng)過(guò)SDS-PAGE分離和質(zhì)譜分析，通過(guò)比較一級(jí)質(zhì)譜圖中三個(gè)同位素型肽段的面積大小進(jìn)行相對(duì)定量，同時(shí)二級(jí)譜圖對(duì)肽段進(jìn)行序列測(cè)定從而鑒定蛋白質(zhì)。

         由于SILAC標(biāo)記技術(shù)是體內(nèi)標(biāo)記技術(shù)，幾乎不影響細(xì)胞的功能，同時(shí)靈敏度高，因此其在蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)領(lǐng)域中得到了廣泛的應(yīng)用，如比較蛋白質(zhì)組學(xué)，蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用，蛋白質(zhì)與DNA相互作用，蛋白質(zhì)與RNA相互作用等領(lǐng)域。
 
二、與體外標(biāo)記技術(shù)相比，輝駿生物SILAC屬于體內(nèi)標(biāo)記，具有以下技術(shù)優(yōu)勢(shì)
     1、高通量，可同時(shí)鑒定并定量數(shù)百至數(shù)千種蛋白質(zhì)；
     2、定量精確，降低由于樣品制備不同而造成的實(shí)驗(yàn)差異；
     3、線性定量范圍廣；
     4、靈敏度更高，蛋白質(zhì)需要量明顯減少；
     5、標(biāo)記采用的是體內(nèi)標(biāo)記技術(shù)，更接近樣品真實(shí)狀態(tài)。
 
三、輝駿生物SIALC技術(shù)服務(wù)流程
 
 
四、輝駿生物SILAC技術(shù)服務(wù)內(nèi)容
    1、細(xì)胞同位素標(biāo)記；
    2、樣本制備與定量；
    3、SDS-PAGE分離；
    4、胰酶酶切后液相分離和質(zhì)譜分析；
    5、數(shù)據(jù)庫(kù)檢索；蛋白質(zhì)定量分析；
    6、相關(guān)生物信息學(xué)分析；
    7、實(shí)驗(yàn)報(bào)告提交。
 
五、送樣須知
    1、技術(shù)咨詢：在您開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，本公司將為您竭誠(chéng)提供最有效的SILAC實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案，本公司提供Lys和Arg均為L(zhǎng)、M 、H標(biāo)記的氨基酸。
    2、為了保證SILAC實(shí)驗(yàn)?zāi)茼樌�進(jìn)行，樣品寄送需滿足以下要求：
   基本要求：SILAC實(shí)驗(yàn)僅適用于能在SILAC培養(yǎng)基中培養(yǎng)的材料，具體情形請(qǐng)咨詢本公司。
   運(yùn)輸要求：液氮或干冰保存寄送，廣州本地客戶可上門收樣。
   注：樣本應(yīng)避免各類污染和反復(fù)凍融。
 
六、輝駿生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容
    1、蛋白質(zhì)鑒定和SILAC定量分析結(jié)果；
    2、顧客指定蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜峰圖；
    3、SILAC實(shí)驗(yàn)完整的實(shí)驗(yàn)步驟、使用儀器、軟件檢索參數(shù)等。
 
七、輝駿生物質(zhì)量承諾
    1、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)腟ILAC實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案確保定量分析結(jié)果可靠；
    2、提供客觀的SILAC實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果。