活體成像在過量表達(dá)SoCYP85A1基因的應(yīng)用

黑脛病是煙草生產(chǎn)中危害最大的病害之一。

近期，來自青島農(nóng)業(yè)大學(xué)的研究人員從菠菜中克隆了一個新的細(xì)胞色素抗性基因SoCYP85A1。該基因在煙草中的過表達(dá)顯著增強(qiáng)了煙草對黑脛病的抗性，但不同轉(zhuǎn)基因株系的抗性水平不同。

在轉(zhuǎn)基因植株中檢測到油菜素甾酮castasterone (CS) 的大量積累。而且，SoCYP85A1對轉(zhuǎn)基因株系的抗氧化酶活性也有促進(jìn)作用。此外，CS含量的變化導(dǎo)致植物內(nèi)源激素穩(wěn)態(tài)受到干擾。

研究結(jié)果表明，SoCYP85A1可以在轉(zhuǎn)錄水平通過調(diào)節(jié)防御酶的活性以及與植物內(nèi)源激素的相互作用，參與煙草對黑脛病菌的防御反應(yīng)。因此，SoCYP85A1可以作為提高煙草和其他經(jīng)濟(jì)作物對黑脛病抗性的潛在候選基因。

文章以題為: Overexpression of SoCYP85A1 Increase the Accumulation of Castasterone and Confers Enhanced Black Shank Tolerance in Tobacco Through Modulation of the Antioxidant Enzymes' Activites 于3月22日發(fā)表在frontiers in Plant Science上。

其中，SoCYP85A1被插入到pB7WG2D,1-GFP作為創(chuàng)建過表達(dá)的矢量，T4代轉(zhuǎn)基因煙草通過PCR和Vilber公司的Newton 7.0 植物活體成像進(jìn)行了雙重驗(yàn)證。

FIGURE 1 | Molecular identification of transgenic tobacco lines. (A) PCR analysis of genomic DNA with specific primers for the ORF of SoCYP85A1. (B) GFP analysis of transgenic lines. (C) RT-PCR analysis of WT and different transgenic lines. M, Molecular marker; WT, Wild type; P, Plasmid; 1–8: transgenic lines.

Newton 7.0植物活體成像，除可用于轉(zhuǎn)基因檢測外，還可以用于微生物侵染，基因表達(dá)調(diào)控，植物抗逆性研究，突變體篩選，植物發(fā)育等相關(guān)研究。

主要特點(diǎn)：

1、-90℃深度制冷CCD相機(jī)，搭載f0.70超級鏡頭，針對Luc報告基因，具有極高的檢測靈敏度；

2、GFP專用的激發(fā)光源和濾光片，有效地避免了葉綠素自發(fā)熒光的干擾；

3、雙載物臺設(shè)計，可Z軸升降，便于調(diào)整視野大小

4、盆栽專用載物臺，可放置不同大小的樣品盆，且可進(jìn)行多角度旋轉(zhuǎn)，避免了葉片之間的遮擋，獲得更加理想的結(jié)果

5、可直接拍攝彩色圖片，獲得綠色植物原圖，方便進(jìn)行信號和明場圖像的對比

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