Alpha®-CETSA®方案：細胞水平小分子結(jié)合相應(yīng)靶向蛋白的驗證

我們不再是我們，我們依然是我們——當Alpha®遇上CETSA®

小分子藥物研發(fā)中，篩選能有效結(jié)合目標蛋白的分子是非常耗時耗（財）力的一個環(huán)節(jié)，但又是必須進行的工作。高失敗率源于結(jié)合情況的錯綜復雜，體外生化實驗的結(jié)合效果，往往不能很好的在細胞水平進行重現(xiàn)。這其中可能是因為分子在穿越細胞膜時，出現(xiàn)了被修飾；也可能是因為純化蛋白和真實細胞環(huán)境的蛋白構(gòu)象不同。例如，在生化水平顯示很好結(jié)合效果的分子，在細胞水平可能結(jié)合的是另一個蛋白。是不是很崩潰……


 
試想，如果有一個高通量解決方案讓你可以直接在細胞水平進行小分子結(jié)合相應(yīng)靶向蛋白的驗證，開不開心，意不意外？

這個方案就是Alpha^®-CETSA^®！

什么是CETSA^®？

CETSA^®是細胞熱遷移實驗（Cellular Thermal Shift Assay）的簡稱，是PELAGO公司2012年在歐洲注冊的專利技術(shù)。該技術(shù)基于的原理是：每種蛋白質(zhì)都有自身的熱熔曲線（如下圖）。隨著溫度的升高，蛋白質(zhì)會發(fā)生降解（藍色曲線）；當?shù)鞍踪|(zhì)結(jié)合小分子以后，該復合蛋白的熱熔曲線會右移（紅色虛線），即相同溫度下，未降解蛋白的量會提高。CETSA^®實驗的樣品來源十分靈活，可以是細胞，也可以是活體給藥以后的組織樣本。


 
傳統(tǒng)的CETSA^®對于天然構(gòu)象蛋白的檢測模式主要有Western-Blot和MS方法，這兩種方法都無法實現(xiàn)高通量的篩選。2019年7月，PELAGO公司正式和PerkinElmer公司達成戰(zhàn)略合作協(xié)議，推出高通量，高靈敏度的CETSA^®HT檢測方案，即Alpha^®-CETSA^®


 
Alpha^®-CETSA^®的操作

1.樣品和化合物進行孵育。
2.進行熱休克操作（建議在PCR儀上進行該操作）。
3.加入合適的裂解液。
4.加入Alpha^® CETSA^®檢測試劑。
5.在具有Alpha^®功能的酶標儀上檢測。


 
最新酶標儀加載Alpha^®功能

PerkinElmer公司的Victor NIVO最新款酶標儀加載了Alpha^®功能，這是目前可以開展Alpha^®CETSA^®檢測細胞水平蛋白-分子相互作用的最小的儀器。


 
目前，PerkinElmer和PELAGO一起推出的蛋白靶點試劑盒有Akt1，BCL-2，EGFR，MEK1和p38 MAKP，工具微珠2套，方便客戶靈活使用這項技術(shù)。更多的商品化試劑盒也會陸續(xù)推出。


 
點擊鏈接，了解更多https://www.perkinelmer.com.cn/category/alpha-CETSA-kits

關(guān)于珀金埃爾默：

珀金埃爾默致力于為創(chuàng)建更健康的世界而持續(xù)創(chuàng)新。我們?yōu)樵\斷、生命科學、食品及應(yīng)用市場推出獨特的解決方案，助力科學家、研究人員和臨床醫(yī)生解決最棘手的科學和醫(yī)療難題。憑借深厚的市場了解和技術(shù)專長，我們助力客戶更早地獲得更準確的洞見。在全球，我們擁有12500名專業(yè)技術(shù)人員，服務(wù)于150多個國家，時刻專注于幫助客戶打造更健康的家庭，改善人類生活質(zhì)量。2018年，珀金埃爾默年營收達到約28億美元，為標準普爾500指數(shù)中的一員，紐交所上市代號1-877-PKI-NYSE。了解更多有關(guān)珀金埃爾默的信息，請訪問www.perkinelmer.com.cn