藥物活性測試技術(shù)—AlphaScreen

近年來在生命科學(xué)領(lǐng)域中興起的新技術(shù)——Alpha，是一種基于增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光的均相免疫技術(shù)，已廣泛用于各項(xiàng)生物實(shí)驗(yàn)的研究，包括應(yīng)用于藥物活性測試。Alpha技術(shù)包括AlphaScreen和AlphaLISA技術(shù)， 兩種方法都使用同一種供體微珠，但使用不同的受體微珠。
AlphaScreen技術(shù)是基于生物分子物質(zhì)的相互作用的原理發(fā)展起來的，如抗原抗體反應(yīng)、蛋白DNA相互作用、蛋白相互作用等，通過分子之間的相互作用形成供體微珠、受體微珠和相互作用分子的復(fù)合物。使用680nm的激光激發(fā)供體微珠導(dǎo)致單線態(tài)氧分子釋放，引發(fā)能量轉(zhuǎn)移級聯(lián)反應(yīng)，受體微珠發(fā)射520~620nm的光波， 具有較強(qiáng)的抗淬滅能力。若生物分子不存在特異的相互作用，單體氧將無法擴(kuò)散到受體微珠，則不會有信號的產(chǎn)生^[1]。
Alpha技術(shù)既可以用于檢測細(xì)胞內(nèi)的各個生物標(biāo)志物，也可以進(jìn)行各類分子相互作用研究，近年來Alpha技術(shù)也可以應(yīng)用于藥物活性檢測。藥物活性測試在藥物質(zhì)量控制中較為重要，目前對藥物的活性分析方法主要是體外檢測。上海美迪西的生物部在體外生物學(xué)領(lǐng)域有豐富廣泛的經(jīng)驗(yàn)，通過酶水平測定、細(xì)胞水平測定、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)、體外同位素測定、穩(wěn)定細(xì)胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技術(shù)等，提供一套完整的生物學(xué)服務(wù)。    
AlphaScreen技術(shù)應(yīng)用于藥物研發(fā)領(lǐng)域，其主要優(yōu)勢在于待測物質(zhì)的范圍寬泛，包括從小分子到大型復(fù)合物；均相體系、快速、穩(wěn)定，靈敏度更高。而且AlphaScreen檢測也不需要熒光標(biāo)簽的引入，避免了空間位阻影響生物分子的相互結(jié)合。AlphaScreen技術(shù)也可以用于檢測諸如細(xì)胞裂解物、血清、血漿、體液等生物學(xué)粗提取，而不會影響測讀效果。
然而AlphaScreen技術(shù)主要的限制在于反應(yīng)體系對于強(qiáng)光或是長時間的室內(nèi)光敏感；某些化合物對于單體氧分子的捕獲會降低光信號；供體珠光漂白效應(yīng)使得信號檢測以單次為佳。與ECL、FMAT技術(shù)相似，AlphaScreen也需要高能激光器；同其他技術(shù)相比，AlphaScreen對于檢測儀器平臺有要求。
AlphaLISA技術(shù)是在AlphaScreen技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展而來，其發(fā)射峰在615nm處，避開了血清以及組織中其他成分的發(fā)射峰。與AlphaScreen相比，AlphaLISA的發(fā)射光會受到500-600nm吸收光干擾的可能性更低，無論這種干擾是來自人工合成的化合物或是天然產(chǎn)物(比如血紅蛋白)，從而使檢測的背景降至最低。高通量的生物標(biāo)志物篩選分析對于自動化檢測儀器平臺的要求較迫切，而目前常見的生物標(biāo)志物檢測技術(shù)為ELISA。AlphaLISA技術(shù)也可以用于生物標(biāo)志物檢測，檢測原理類似于雙抗體夾心法，該技術(shù)能夠很好地滿足生物標(biāo)志物的高通量篩選需求。
AlphaLISA技術(shù)還可以用于合成化合物的活性測試。如有研究者設(shè)計(jì)、合成一系列黃酮乙酸類衍生物腫瘤血管破壞劑，并測定其體外抗腫瘤活性^[2]。研究者以鄰羥基苯乙酮為起始原料，通過氯甲基化、氰基取代、水解以及縮合等反應(yīng)得到相應(yīng)的目標(biāo)化合物；以5，6-二甲基呫噸酮-4-乙酸(DMXAA)為陽性對照藥，通過3種模型對目標(biāo)化合物的抗腫瘤活性進(jìn)行評價(jià)，包括采用Al-phaLISA法檢測目標(biāo)化合物對RAW 264.7細(xì)胞的促TNF-α分泌作用、采用MTS法測定化合物的細(xì)胞毒作用，以及采用雞胚絨毛尿囊膜模型測定化合物對雞胚血管生成的影響。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)合成的18個化合物均未見文獻(xiàn)報(bào)道，其結(jié)果經(jīng)1 H-NMR、MS譜確證；活性評價(jià)結(jié)果表明有3個目標(biāo)化合物在抗腫瘤測試中表現(xiàn)出較好的體外抗腫瘤活性.
[1] AlphaLISA技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用[J].
[2] 黃酮乙酸類衍生物腫瘤血管破壞劑的設(shè)計(jì)、合成及其抗腫瘤活性的初步評價(jià)[J].