淺析流式CBA法用于細(xì)胞因子檢測的優(yōu)點及缺點

細(xì)胞因子在體內(nèi)具有重要的病理作用，在感染、炎癥、自身免疫病、免疫缺陷疾病等狀態(tài)下，部分細(xì)胞因子會明顯變化，根據(jù)這些指標(biāo)可以判斷機體的免疫功能。血清、血漿或組織液中細(xì)胞因子檢測可以對疾病診斷和治療做出相應(yīng)評價,具有重要的應(yīng)用價值。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)以及腫瘤學(xué)等領(lǐng)域的流式細(xì)胞術(shù)是細(xì)胞因子檢測的一種方法。
由于血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清、積液中的細(xì)胞因子含量低，不容易檢測，加上樣本數(shù)量少，傳統(tǒng)的方法無法滿足多因子檢測。流式微球捕獲芯片技術(shù)（CBA）微量樣本多重蛋白定量技術(shù)，是用流式細(xì)胞儀對多重蛋白進(jìn)行定量檢測的方法，能夠同時對樣本中的多個指標(biāo)進(jìn)行定性、定量檢測，可用于細(xì)胞因子檢測。
流式細(xì)胞儀技術(shù)（FCM）技術(shù)可以應(yīng)用流式細(xì)胞儀，結(jié)合單克隆抗體技術(shù)、免疫熒光染
色技術(shù)，對快速流動液體中的單細(xì)胞進(jìn)行多種參數(shù)測量和分析。CBA 檢測系統(tǒng)采用聚苯乙烯熒光微球連結(jié)特定的捕獲抗體，捕捉待測物，同時再加入待測物的熒光抗體，三者形成夾心復(fù)合物，通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。流式細(xì)胞術(shù)的優(yōu)點是同時可以進(jìn)行多參數(shù)檢測，快速并且信息量大。
（1）能夠同時對單個樣本進(jìn)行多種檢測
小鼠血清Th1／Th2／Th17 相關(guān)細(xì)胞因子是實驗中經(jīng)常會用到的檢測指標(biāo)，由于血清量少很難運用傳統(tǒng)的方法如ELISA法進(jìn)行多因子檢測，而CBA 法正好能解決這一問題，它能夠一次性對血清中的IL－2、IL－4、IL－6、IFN－Υ、TNF、IL－10、IL－17A進(jìn)行定量檢測。美迪西可以為廣大醫(yī)藥研發(fā)人員提供細(xì)胞因子及生物標(biāo)志物的檢測服務(wù)，其生物分析部基礎(chǔ)設(shè)施齊全、儀器設(shè)備先進(jìn)，擁有的流式CBA、MSD、Luminex系統(tǒng)等高端技術(shù)平臺可以進(jìn)行各種single plex或multiplex多形式的細(xì)胞因子和生物標(biāo)志物的檢測。
（2）所需樣本量少、靈敏度高等
傳統(tǒng)ELISA方法每項實驗樣本用量50-200μl，而流式CBA檢測技術(shù)樣本用量少于50μl且分析靈敏度高達(dá)2.8pg/mL。對于稀有樣本，CBA只需少量樣本即可檢測細(xì)胞因子、抗體、抗原等多個指標(biāo)。
（3）穩(wěn)定性好
CBA 穩(wěn)定性好、可重復(fù)性高，能避免酶聯(lián)免疫放大技術(shù)使信號失真導(dǎo)致的假陽性。
流式細(xì)胞術(shù)檢測用于細(xì)胞因子檢測是一種相對快速、重復(fù)性好并能準(zhǔn)確定量的方法。但由于胞內(nèi)分析步驟復(fù)雜，涉及變異因素多，可能會出現(xiàn)結(jié)果不穩(wěn)定，較難重復(fù)等問題。
如在檢測血清時，由于血清成分復(fù)雜，細(xì)胞因子含量差距大，實驗中經(jīng)常會出現(xiàn)分群不明顯、微球聚集、濃度太低等現(xiàn)象，對實驗結(jié)果造成很大影響。如流式CBA法的微球由聚苯乙烯材料制作而成，血清加入微球之后如果沒有充分渦旋，容易沉淀聚集，細(xì)胞因子不能充分跟微球結(jié)合，導(dǎo)致多群甚至聚集現(xiàn)象發(fā)生，檢測結(jié)果將是無效的。需要從制備混合微球開始到加入實驗管，直到上機檢測前每一步都必須充分渦旋，以避免微球發(fā)生聚集。
而且CBA操作過程繁瑣，對實驗人員技術(shù)要求高，從一定程度上限制了其廣泛使用。因此在具體實驗過程中，需要多次摸索，結(jié)合實驗中所遇到的問題進(jìn)行分析，找出解決問題的辦法，并在今后實驗中規(guī)避實驗中的一些問題的出題，來提高實驗的有效性和準(zhǔn)確性。